Question

营养缺陷型菌株就是在人工诱变或自发突变后，微生物细胞代谢调节机制中的某些酶被破坏，使代谢过程中的某些合成反应不能进行的菌株。这种菌株能积累正常菌株不能积累的某些代谢中间产物，为工业生产提供大量的原料产物。以下是实验人员利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程。回答下列问题：

（1）过程①的接种方法为______，与基本培养基（只含碳源、无机盐、水）相比，待测培养皿中特有的成分有______。

（2）进行②过程培养时，应先将丝绒布转印至___________上（“基本培养基”或“完全培养基”），原因是____________________________，从_____________培养基上获得相应的营养缺陷型菌株。釆用影印法培养的优点是______________________________。

（3）为了进一步完成对初检的营养缺陷型菌株的鉴定，实验人员进行了如下操作：

①用接种针挑取______（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全培养液的离心管中，28℃振荡培养1～2天后，离心，取沉淀物用______水洗涤3次，并制成菌悬液。

②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化并冷却至45〜50℃的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域，标记为A、B、C、D、E。

③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。

组别	所含氨基酸
A	组氨酸	苏氨酸	谷氨酸	天冬氨酸	亮氨酸
B	精氨酸	苏氨酸	赖氨酸	甲硫氨酸	苯丙氨酸
C	酪氨酸	谷氨酸	赖氨酸	色氨酸	丙氨酸
D	甘氨酸	天冬氨酸	甲硫氨酸	色氨酸	丝氨酸
E	半胱氨酸	亮氨酸	苯丙氨酸	丙氨酸	丝氨酸

在上述鉴定实验中，发现在培养基A、D区域出现生长圈，说明该营养缺陷型菌株属于______缺陷型。

Answer

稀释涂布平板法 氨基酸 基本培养基 防止将特定营养成分带入培养基 完全 同种菌株的接种位置相同 菌落A 无菌水 天冬氨酸缺陷型

【解析】

分析题图：图中首先利用稀释涂布平板法分离细菌，然后运用“影印法”将菌种接种到两种培养基中：基本培养基、完全培养基，在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，据此可以选择出氨基酸缺陷型菌株。

（1）根据过程①所得培养基中菌落的分布结果可以判断，该过程所采用的接种方法为稀释涂布平板法。图示是利用影印法初检氨基酸缺陷型菌株的过程，据此可知，与基本培养基（只含碳源、无机盐、水）相比，待测培养皿中的特有的成分有氨基酸。

（2）为了防止将特定营养成分带入培养基，进行②过程培养时，应先将丝绒布转印至基本培养基上。在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此从完全培养基上可获得相应的营养缺陷型菌株。采用影印法培养的优点是同种菌株的接种位置相同。

（3）①在基本培养基中，氨基酸缺陷型菌株不能生长，而在完全培养基中能够生长，因此图中菌落A应该为氨基酸缺陷型菌株，则用接种针挑取菌落A接种于盛有完全培养液的离心管中，28℃振荡培养1~2天后，离心，取沉淀物用无菌水洗涤3次，并制成菌悬液。

②加入菌悬液的无菌培养皿中应倾注15mL融化并冷却至45-50℃的基本培养基。

③表中信息显示：A、D区域含有、其它区域不含有的氨基酸是天冬氨酸，而实验结果只有A、D区域出现生长圈，说明该营养缺陷型菌株属于天冬氨酸缺陷型。