Question

下列有关利用图甲和图乙信息来制备基因表达载体的说法正确的是（    ）

A.如图甲将目的基因“切出”，可选择Pst I，不能选择Sma I

B.结合图甲和图乙可知在制备基因表达载体时可选择用PstI和EcoRI两种限制酶切割目的基因和质粒

C.如果质粒上所选限制酶的酶切位点不止一个，则切割后的质粒可能会丢失某些片段

D.若质粒上标出T-DNA片段，则所选限制酶切点应位于T-DNA片段中

Answer

ACD

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因：DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原―抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、如图甲将目的基因“切出”，可选择PstⅠ，不能选择SmaⅠ，因为用限制酶SmaⅠ切割会破坏目的基因，A正确；
B、使用限制酶PstⅠ切割质粒时会破坏标记基因（抗生素抗性基因），使用限制酶EcoRⅠ切割质粒时会破坏终止子，B错误；
C、如果质粒上所选限制酶的酶切位点不止一个，则切割后的质粒可能会丢失某些片段，C正确；
D、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。因此若质粒上标出T-DNA片段，则所选限制酶切点应位于T-DNA片段中，D正确。
故选ACD。