Question

请回答基因工程方面的问题：

（1）基因工程中目的基因的来源是_________________________和____________________。

（2）在免疫学中把腺病毒基因组的关键区域“删掉”，再把其它对人类更危险的病毒“装上”，这样腺病毒就会像小车一样，绑着一个危险病毒，在人类的免疫系统里“游街”，让免疫系统记住该危险病毒的样子，生成抗体。腺病毒作为基因工程的运载体，进入人体细胞需借助____________（填“显微注射技术”或“细胞自身的内吞作用”）。它除对靶细胞具有较高的转化效率、在宿主细胞中不会引起免疫排斥反应外，还应该具有运载体具备的其它条件_________________________（列举两点）。

（3）基因工程中的单酶切法是指某一种限制酶可将含有目的基因的DNA片段和运载体质粒进行切割；双酶切法是指两种限制酶分别对含有目的基因的DNA片段和运载体质粒进行切割。请分析当用DNA连接酶进行连接时，单酶切法产生的由2个DNA片段之间连接产物有________________________三种情况；双酶切法较单酶切法的优势在于________________________。

Answer

从自然界中已有的物种中分离出来 用人工的方法合成 细胞自身的内吞作用 基因组（遗传物质）稳定，不容易突变；操作简单；病毒宿主范围广；在人体内应用安全（不发生整合，无插入突变或激活癌基因的风险） 目的基因与目的基因的连接、目的基因与质粒的连接、质粒与质粒的连接 防止质粒以及含有目的基因的DNA片断的自身环化、避免目的基因的反向连接、连接后的片断种类减少，降低筛选的难度（避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接）。

【解析】

基因工程的基本操作程序主要包括：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。DNA重组技术的基本工具包括：限制性核酸内切酶、DNA连接酶、运载体。限制性核酸内切酶能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。运载体一般含有一个至多个限制酶切位点，供外源DNA片段插入，携带外源DNA片段进入受体细胞后，能在细胞中自我复制，或整合到染色体DNA上随染色体DNA进行同步复制，此外还需含有标记基因，以供重组DNA的鉴定和选择。

（1）获取目的基因是实施基因工程的第一步，目的基因可以从自然界中已有的物种中分离出来，也可以用人工的方法合成。

（2）以腺病毒作为基因工程的运载体时，由于运载体是大分子物质，进入人体细胞需借助细胞自身的内吞作用。腺病毒作为运载体应具备的条件有：基因组（遗传物质）稳定，不容易突变；操作简单；病毒宿主范围广；在人体内应用安全（不发生整合，无插入突变或激活癌基因的风险）。

（3）利用单酶切法对含目的基因的DNA片段和运载体质粒切割时，目的基因片段和质粒切口处的两个黏性末端都能相互连接，因此产生的由2个DNA片段之间连接产物有目的基因与目的基因的连接、目的基因与质粒的连接、质粒与质粒的连接三种情况；双酶切法处理后的目的基因片段和质粒的黏性末端不能自连，优点是防止质粒以及含有目的基因的DNA片段的自身环化、避免目的基因的反向连接、连接后的片段种类减少，降低筛选的难度（避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接）。