Question

以下是生物学技术制备抗体的两个途径模式简图。

（1）上图中过程①的完成采用的方法有：_______，依据的生物学原理_______。

（2）过程④要用到的酶有__________，过程⑥采用的方法叫__________。

上图中的质粒本身含有氨苄青霉素抗性基因和M、N两种限制酶（两种酶切割序列完全不同）切割位点。若用限制酶M和N切割，通过凝胶电泳分离，分析得如下表。

分子量（kb）	1．0	2．0	3．0	4．0	5．0	6．0	7．0	8．0	9．0	10．0
酶M	+				+					+
酶N							+		+
酶M + 酶N	+	+	+	+		+
凝胶电泳结果（1kb=1000对碱基，+表示检测到该片段的存在

（3）该质粒长度为_____kb，在该质粒中，M酶与N酶的切割点分别有______、______个。
 

（4）氨苄青霉素抗性基因的作用是______________。

（5）在表达载体中，启动子的作用是：__________识别和结合的部位，驱动Ⅵ基因的转录。

Answer

用聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒 细胞膜具有流动性 逆转录酶、DNA聚合酶 Ca2+处理 16 3 2 作为标记基因 RNA聚合酶）

【解析】

据图分析，细胞A表示效应B细胞(浆细胞)，细胞Y表示杂交瘤细胞，结构甲表示基因表达载体，①过程表示动物细胞融合，②过程表示杂交瘤细胞的培养，③过程表示提取信使RNA，④过程表示逆转录，⑤表示基因表达载体的构建，⑥表示导入受体细胞。

（1）上图中过程①过程表示动物细胞融合，采用的方法有：用聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒，特有的方法是灭活的病毒诱导；依据的生物学原理细胞膜具有流动性；

（2）过程④表示逆转录，需要逆转录酶、DNA聚合酶；过程⑥为导入受体细胞过程，由于受体细胞是大肠杆菌细胞，所以可以采用感受态细胞法，需要用Ca2+处理大肠杆菌。

（3）该质粒为环状DNA，用酶M得到3个片段，则可知有质粒上有3个酶M切点，用酶N切割产生了两个片段，则说明酶N的切点有2个，用这两种酶同时切割获得5个片段，更进一步证明了上述推测的正确性，用酶N切割得到的两个片段的长度分别为7和9，则该质粒的长度为7+9=16kb。

（4）氨苄青霉素抗性基因的作用是作为标记基因，从而将导入重组质粒（目的基因表达载体）的受体细胞筛选出来。

（5）在表达载体中，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，从而驱动了Ⅵ基因的转录过程。