Question

如图表示血红蛋白提取和分离实验的部分装置或操作方法，请回答下列问题：

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是______________________________________________。

（2）如图甲表示______________过程，该操作目的是去除样品中______________的杂质。现有一定量的血红蛋白溶液，进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以________________________（写出一种方法）。一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液是否出现紫色，请说明判断的依据: ______________________________________。

（3）如图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序是______________（用序号表示）。在进行④操作前，应该等样品____________________________，且要______________（填“打开”或“关闭”）下端出口。

（4）如图丙，a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是______，原因是______________________________________________。

Answer

防止红细胞吸水涨破 透析（粗分离） 分子量较小 增加缓冲液的量 双缩脲试剂与袋内的血红蛋白发生反应，会产生紫色物质 ②③④① 完全进入凝胶层 关闭 a a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快

【解析】

血红蛋白提取和分离原理，蛋白质的物理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。

凝胶色谱法原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤以去除杂质蛋白，洗涤时应使用生理盐水而不使用蒸馏水的原因是生理盐水保持红细胞渗透压的稳定而不破碎，在未洗净血浆中杂质蛋白前，红细胞如果破裂了，就可能使血红蛋白和杂质蛋白混在一起，加大了分离难度。

（2）图甲表示血红蛋白的透析过程，即血红蛋白的粗分离，目的是去掉分子量较小的杂质。进行上述操作时若要尽快达到理想的实验效果，可以增加缓冲液的量。一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，双缩脲试剂与袋内的血红蛋白发生反应，会产生紫色物质。

（3）如图乙，往色谱柱中加样的正确操作顺序可依据样品在色谱柱及凝胶层中的渗入量进行分析，可以得出是②③④①。在进行④操作前，应该等样品完全进入凝胶层，且要关闭下端出口。

（4）如图丙，a、b均为蛋白质分子，a相对分子质量较大，无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，所以a先从层析柱中洗脱出来。