Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）请回答与微生物培养和植物组织培养有关的问题：

（1）高压蒸汽灭菌是常见的无菌操作。在对培养基进行高压蒸汽灭菌时，发现灭菌锅内压力达到1kg/cm²而温度未达到121℃，为同时达到设定的温度和压力要求，此时应该___________（填操作过程）。利用果酒制作果醋时，___________（填“能”或者“不能”）对果酒进行高压蒸汽灭菌。

（2）制作泡菜时，蔬菜入坛前在开水中浸1 min和坛内加入一些___________以减少发酵时间。测定泡菜汁样品液亚硝酸盐的含量时，如果错将光照波长550nm变成450nm，OD值会变___________。

（3）在超净台内接种目标菌种时，紫外灯应该关闭，这是因为___________（至少写出两点）。

（4）在配制MS培养基时，常先配成母液后用时稀释，这样做的优点是___________。在对菊花茎段进行组织培养时，一般先选用___________培养基。

（二）回答与基因工程和植物克隆有关的问题：

科研工作者将TaNHX2基因转移到某植物细胞内，获得了转基因耐盐植株新品种。下图是获取的含有目的基因的DNA片断，Sau3AⅠ、 EcoRⅠ、 BamhⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列分别是↓GATC、G↓AATTC、G↓GATCC，质粒上各有一个Sau3AⅠ和 ECoRⅠ的酶切位点。请分析回答问题：

（1）若用BamH Ⅰ切割图中所示的DNA片段获得了目的基因，则需选用___________酶切割质粒，以便构建重组质粒，该方案的缺陷是会出现目的基因和质粒的自我环化以及___________。故切割图中所示DNA片段的最佳方案是选用___________酶。实验中酶作用的强弱可用___________表示。

（2）将获得的重组质粒导入原生质体，导入方法有农杆菌转化法和___________。原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，其作用是___________。原生质体经过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成___________。

（3）为了从个体水平检测成果，需要进行的操作是___________。

Answer

将锅内气体放尽后重新加热 不能 腌制过的泡菜汁 小 可以防止因紫外线照射引起菌种变异，又可以避免紫外线对人体的伤害 在配制培养基时可以减小加入微量物质时出现的误差 生芽（发芽） Sau3AI 目的基因在质粒上的连接方向不确定 EcoRI和 BamHI 酶活性 显微注射法 维持一定的渗透压，保持原生质体的形态 愈伤组织 将转基因植株种植在盐碱地，观察其生长状况

【解析】

消毒和灭菌

消毒

灭菌

概念

使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）

使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）

常用方法

煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

适用对象

操作空间、某些液体、双手等

接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（一）（1）在对培养基进行高压蒸汽灭菌时，发现灭菌锅内压力达到1kg/cm2而温度未达到121℃，为同时达到设定的温度和压力要求，此时应该将锅内气体放尽后重新加热。利用果酒制作果醋时，不能对果酒进行高压蒸汽灭菌，否则会杀死菌种。

（2）泡菜汁中含有已经扩增的一定量的发酵菌种，所以在制作泡菜时，蔬菜入坛前在开水中浸1min和坛内加入一些腌制过的泡菜汁以减少发酵时间。测定泡菜汁样品液亚硝酸盐的含量时，如果错将光照波长550nm变成450nm，OD值会变小。

（3）在超净台内接种目标菌种时，紫外灯应该关闭，这是因为可以防止因紫外线照射引起菌种变异，又可以避免紫外线对人体的伤害。

（4）在配制MS培养基时，常先配成母液后用时稀释，这样在配制培养基时可以减小加入微量物质时出现的误差；在对菊花茎段进行组织培养时，一般先选用生芽（发芽）培养基。

（二）（1）根据各种限制酶的识别序列及切割位点可知，限制酶BamHⅠ切割形成的黏性末端与限制酶Sau3AI切割形成的黏性末端相同，因此若用BamHⅠ切割图中所示的DNA片段获得了目的基因，则需选用Sau3AI酶切割质粒，以便构建重组质粒；

用一种酶切割目的基因或质粒，导致目的基因或质粒两端的黏性末端相同，这样会出现目的基因和质粒的自我环化以及目的基因在质粒上的连接方向不确定；因此，切割质粒应该用Sau3AⅠ和EcoRⅠ酶，而切割图中DNA片段需要用EcoRI和BamHI酶；实验中酶作用的强弱可用酶活性表示。

（2）将获得的重组质粒导入原生质体，导入方法有农杆菌转化法和显微注射法；原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇，其作用是维持一定的渗透压，保持原生质体的形态；原生质体经过细胞壁再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。

（3）从个体水平检测成果的方法是将转基因植株种植在盐碱地，观察其生长状况。