Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）回答与酵母菌制酒相关的问题

（1）酵母菌的厌氧呼吸能将糖氧化成酒精，但培养基中酒精的浓度不能超过___________，否则酵母菌就会死亡。相比传统酒精发酵，可采用固定化酵母生产酒精，其___________（回答优点有一点即可）。

（2）固定化酵母需要制备固定化细胞，首先将接种在___________的菌种采用___________方法接种到YPD固体培养基上，28℃恒温培养一段时间的目的是___________，然后挑取单菌落接种到三角瓶的液体培养基，将三角瓶放置在摇床上培养，12 小时后取酵母菌悬液离心，弃___________收集菌体，再加入无菌水制成酵母菌悬液。

（3）采用包埋法固定酵母菌，不仅可以获得__________，加快发酵速度；而且酒精不断被去除，因此没有最终产物的抑制问题；又由于细胞被包埋在不透气凝胶中，有利于为酵母菌创造__________条件，节省发酵成本。

（二）利用单克隆抗体可以快速诊断病毒感染，避免延误治疗，制备单克隆抗体的基本方法如下：

（1）首先将相同抗原两次或多次注射小鼠，使其发生免疫反应，目的是为了获得__________。

（2）在化学试剂__________的诱导下，B 淋巴细胞和骨髓瘤细胞的细胞膜会发生一定程度的__________，细胞就可以实现相互粘连而融合在一起；由于细胞融合的随机性，并且有部分细胞未发生融合，可用__________筛选出杂交瘤细胞，该过程用到了__________和细胞融合技术。

（3）对筛选出的杂交瘤细胞进行多次抗体检测和__________，就可以获得足够数量的能分泌 所需抗体细胞，多次抗体检验是由于部分融合细胞在培养过程会丧失产生抗体的能力，对杂交 瘤细胞染色体组型分析，发现融合细胞容易发生__________，从而导致细胞不能产生抗体。

（4）将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射小鼠腹腔内培养，与体外培养相比，其优点是________________________________________（至少答两点）。

Answer

16% 可连续生产酒精/既能与底物接触，又能与产物分离 斜面 划线分离 使酵母菌恢复活性/活化菌种 上清液 高密度的酵母菌 无氧条件 更多产生相应抗体的淋巴细胞或脾细胞 聚乙二醇 损伤 选择培养基/HAT培养基 动物细胞培养技术 克隆培养 染色体丢失 抗体产量高、无需提供营养物质、无需提供无菌环境、操作简便

【解析】

1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。

2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（一）：

（1）酵母菌的厌氧呼吸能将糖氧化成酒精，但培养基中酒精的浓度不能超过16%，否则酵母菌就会死亡。相比传统酒精发酵，采用固定化酵母生产酒精可连续生产酒精；既能与底物接触，又能与产物分离。

（2）固定化酵母时，首先将接种在斜面上的菌种采用划线分离方法接种到YPD固体培养基上，28℃恒温培养一段时间可以使酵母菌恢复活性，然后挑取单菌落接种到三角瓶的液体培养基，将三角瓶放置在摇床上培养，由于菌体密度大，分布在下层，故12小时后取酵母菌悬液离心，弃上清液收集菌体，再加入无菌水制成酵母菌悬液。

（3）包埋法固定酵母菌，不仅可以获得高密度的酵母菌，加快发酵速度；而且酒精不断被去除，因此没有最终产物的抑制问题；又由于细胞被包埋在不透气凝胶中，有利于为酵母菌创造无氧条件，节省发酵成本。

（二）：

（1）将相同抗原两次或多次注射小鼠，使其发生免疫反应，目的是为了获得更多产生相应抗体的淋巴细胞或脾细胞。

（2）在化学试剂聚乙二醇的诱导下，B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的细胞膜会发生一定程度的损伤，细胞就可以实现相互粘连而融合在一起；由于细胞融合的随机性，并且有部分细胞未发生融合，可用特殊的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该过程用到了动物细胞培养技术和细胞融合技术。

（3）由于杂交瘤细胞种类多，所以可对筛选出的杂交瘤细胞进行多次抗体检测和克隆培养，就可以获得足够数量的能分泌所需抗体细胞，多次抗体检验是由于部分融合细胞在培养过程会丧失产生抗体的能力，对杂交瘤细胞染色体组型分析，发现融合细胞容易发生染色体丢失，从而导致细胞不能产生抗体。

（4）将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞注射小鼠腹腔内培养，与体外培养相比，其优点是抗体产量高、无需提供营养物质、无需提供无菌环境、操作简便。