Question

酿酒酵母普遍应用于白酒、红酒、啤酒和果汁饮料的生产，其生物合成过程会形成多种多样的代谢产物，从而对食品风味产生重要影响。以下是从酒曲样品中分离出酵母菌的过程：

处理酒曲样品→过滤→系列稀释至10^-2—10^-7→选择适宜稀释度→涂布固体培养基→28℃下培养48h→挑取典型菌落→镜检→菌种鉴定→菌种保藏。请回答下列有关问题：

（1）制备固体培养基时，采用___________法灭菌15min~20min。

（2）通过稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目。为保证结果准确，一般选择的稀释浓度要保证涂布后在培养基表面形成___________。涂布平板操作时应在___________附近进行。

（3）菌种鉴定后要进行菌种保藏，具体方法是：将菌种接种于固体斜面培养基上，28℃培养后，将试管于4℃的冰箱保存。这种方法保存的时间不长，菌种容易___________。若想长期保藏，可以采用___________的方法，放在___________的冷冻箱中保存。

（4）酵母菌常用于制作葡萄酒，酒精发酵时一般将温度控制在___________，常用___________检测发酵后是否有酒精产生。

Answer

高压蒸汽灭菌 单个菌落 酒精灯火焰 被污染或产生变异 甘油管藏 -20℃ 18-25℃ 重铬酸钾

【解析】

实验室常用灭菌方法：

1、灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌。此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌。

2、干热灭菌：将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃加热1～2h可达到灭菌目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以用这种方法灭菌。

3、高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，一般在压力为100kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30min，如培养细菌用的培养基与培养皿。

（1）对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。

（2）通过稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目时，为保证结果准确，一般选择的稀释浓度要保证涂布后在培养基表面形成单菌落。涂布平板操作时为防止杂菌污染，应在酒精灯火焰附近进行。

（3）将菌种接种于固体斜面培养基上，28℃培养后，将试管于4℃的冰箱保存。这种方法是临时保藏法，其保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。若想长期保藏，可以采用甘油管藏的方法，放在-20℃的冷冻箱中保存。

（4）酵母菌常用于制作葡萄酒，酒精发酵时一般将温度控制在18-25℃，常用酸性重铬酸钾检测发酵后是否有酒精产生。