Question

哺乳动物成熟的红细胞,在生命科学研究中有着广泛的应用。请回答下列有关问题：

（1）从哺乳动物成熟的红细胞中提取血红蛋白时,首先要用相当于红细胞液体体积五倍的__________洗涤红细胞，直至__________________，表明红细胞已经洗涤干净。然后用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂,释放出血红蛋白。

（2）得到血红蛋白混合液之后,可先用离心法进行样品的处理及粗分离，再通过__________法进一步纯化。使用该方法纯化时，首先分离得到大分子蛋白质的原因是_______________。

（3）用凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，需要在凝胶中加入SDS，目的是______________________，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。

（4）若要分解血红蛋白，需要用到蛋白酶。固定化酶常用____________法，将酶进行固定化的优点是______________________。

Answer

生理盐水 上清液不再呈现黄色 凝胶色谱 相对分子量较大的蛋白质不能进入凝胶内部的通道，移动速度较快 掩盖不同蛋白质间的电荷差别 化学结合或物理吸附法 方便回收和重复利用

【解析】

1、选哺乳动物成熟的红细胞作实验材料的原因（1）动物细胞没有细胞壁，不但省去了去除细胞壁的麻烦，而且无细胞壁的支持、保护，细胞易吸水涨破。（2）哺乳动物和人成熟的红细胞，没有细胞核和具有膜结构的细胞器，易用离心分离法得到不掺杂细胞内膜系统的纯净的细胞膜。
2、血红蛋白质的提取和分离：
（1）原理：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。
（2）血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白溶液。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面一洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
3、电泳法是利用待测样品中各种分子带电性质的差异和分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离或鉴定。

（1）从哺乳动物成熟的红细胞中提取血红蛋白时，首先要用相当于红细胞液体体积五倍的生理盐水洗涤红细胞3次，直至上清液不再呈现黄色，然后用蒸馏水和甲苯使红细胞破裂，释放出血红蛋白。
（2）得到血红蛋白混合液之后，可先用离心法进行样品处理及粗分离，再通过凝胶色谱法进一步纯化。凝胶色谱法的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢，因此先从色谱柱洗脱出来的是大分子蛋白质。
（3）用凝胶电泳法测定蛋白质分子量时，需要在凝胶中加入SDS，目的是消除净电荷对迁移率的影响（或掩盖不同种蛋白间的电荷差别），使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
（4）固定化酶常用化学结合或物理吸附法，将酶进行固定化的优点是方便回收和重复利用。