Question

通过咽拭子取样进行RT-PCR技术检测是目前临床上诊断新型冠状病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸检测的RT-PCR试剂盒的部分工作原理简图如下。回答下列问题：

（1）RT-PCR是指以病毒的RNA为模板通过_________过程合成cDNA，并对cDNA进行PCR扩增的过程。进行RT-PCR过程中，需要加入的酶有__________。

（2）利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时，除借助上述RT-PCR技术外，还需要有特异性探针。制作该探针的依据是__________，利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是___________。

（3）除核酸检测外，研究人员还研发了基于病毒蛋白的检测技术，该项技术的关键是生产出能与新冠病毒结合的特异性抗体。生产该种抗体的大致方案如下：

①向小鼠体内注射新冠病毒的抗原蛋白；

②分离免疫小鼠的B淋巴细胞，并与小鼠的骨髓瘤细胞融合，多次筛选、检测，最终获得所需杂交瘤细胞；

③将获得的杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，获得大量的特异性抗体。

上述生产抗体的方案中使用的技术手段有__________，其中步骤②中获得的杂交瘤细胞具有__________等特点；步骤③中为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是__________。

Answer

逆转录 逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶 新型冠状病毒的（核糖）核苷酸序列 分子杂交 动物细胞培养、动物细胞融合 既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体 定期更换培养液

【解析】

一、PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
二、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（1）以RNA为模板合成cDNA的过程为逆转录过程，该过程需要逆转录酶的参与，利用PCR技术对cDNA进行扩增时需要耐高温DNA聚合酶的参与。
（2）探针是指被放射性同位素标记或荧光标记的一段单链核酸，因此制作该探针的依据是新型冠状病毒的核苷酸序列；利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是分子杂交。
（3）上述方案制备的是单克隆抗体，采用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合；杂交瘤细胞的特点是既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体；步骤③中为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换培养液。