Question

稻田除草后残留的除草剂A和除草剂B会污染环境。某科研小组欲从土壤中筛选能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物（除草剂A和除草剂B均可作为氮源）。请回答下列问题：

（1）取土样：取多年_____________的稻田土壤放入塑料瓶中备用。

（2）配制培养基：将除草剂A和除草剂B混合后，用于制液体培养基甲取部分液体培养基甲，并加入_____________（填凝固剂名称）配制固体培养基乙。为了检测配制的固体培养基乙是否灭菌合格，需要进行的操作是将一部分空白培养基乙培养一段时间，观察_____________。

（3）富集培养：将适量土样加入培养液甲中，置于恒温摇床上振荡培养一段时间。富集培养的目的是______________________；富集培养过程中振荡的作用是使所培养的微生物能充分利用___________。

（4）分离纯化：将富集培养的菌液涂布到培养基乙之前，需要进行的操作是_____________。接种培养后，最终获取优势菌落，保存菌种。

（5）复选：为进一步鉴定上一步骤中分离纯化的优势菌种能否同时分解除草剂A和除草剂B，还需配制两种培养基——丙和丁，而后将上述优势菌种分别接种到培养基丙和丁中进行培养观察，则培养基丙和丁的营养组成特点是__________________________。

Answer

同时使用除草剂A和除草剂B 琼脂 培养基上是否有菌落生长 增加能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物（目标微生物）的数量 养料和氧气 梯度稀释 分别以除草剂A和除草剂B为唯一氮源

【解析】

1.微生物接种常用的两种方法：

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后，可形成单菌落。

2.选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。

（1）欲筛选能同时分解除草剂A和除草剂B的微生物，需要选用多年同时使用除草剂A和除草剂B的稻田土壤。

（2）制取固体培养基时需加入凝固剂琼脂。为了检测所配制培养基是否灭菌合格，可将空白培养基培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生长，如果培养基上有菌落生长，说明灭菌不合格；如果培养基上没有菌落生长，说明灭菌合格。

（3）富集培养的目的是使那些能够适应这种营养条件的微生物得以迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制。富集培养中不断振荡培养瓶能提高培养液中溶解氧的含量，同时使微生物能够充分利用培养基中的养料和氧气，进而提高营养物质的利用率。

（4）富集培养的菌液中微生物浓度较大，直接涂布到培养基上进行培养，不容易得到单菌落，所以需要经过梯度稀释而后再接种，这样操作后可使富集培养的菌液中的微生物细胞分散开来。

（5）为进一步鉴定获得的优势菌种能否同时分解除草剂A和除草剂B还需配制分别以除草剂A和除草剂B为唯一氮源的培养基丙和丁，再将上述优势菌种分别接种到培养基丙和丁中进行培养观察。