Question

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O₂或CO₂的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

（1）将实验流程补充完整：A为________________，B为______________。凝胶色谱法是根据__________________来分离蛋白质的有效方法。

（2）洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤次数过少，无法完全除去。

（3）在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7．0)的目的是_____________________________如果红色区带______________，说明色谱柱制作成功。

Answer

血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小 杂蛋白(或血浆蛋白) 能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致，同时还可加速样品在凝胶柱中的流动 均匀一致地移动

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：
（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放。
（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。
（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。
（4）纯度鉴定：SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2、分析题图：A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（1）样品处理和粗分离过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以A表示血红蛋白的释放。粗分离得到的蛋白质可用凝胶色谱法进行纯化，其中B表示样品的加入和洗脱。凝胶色谱法的原理是分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。即凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法。
（2）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白。
（3）磷酸缓冲液（pH为7.0）能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致，同时可加速样品在凝胶柱中的流动。如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀一致地移动。