Question

内皮素（ET）是一种多肽，它有促进血管收缩和平滑肌细胞增殖等作用。内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体（ET_A）结合而发挥生理效应。科研人员通过构建基因的表达载体，实现ET_A基因在细胞中高效表达，其过程如下（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为C^↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C^↓TCGAG）。请分析回答：

（1）完成过程①需要的酶是___________；过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是使RNA链和________链分开。

（2）过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_________键断开，形成目的基因的黏性末端是_____________（选填“TCGA-”或“-TCGA”）。用______种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向连接到载体上或防止目的基因和质粒自身环化。

（3）过程⑥是否成功导入，可将大肠杆菌培养在含有_____________的培养基中进行筛选。

（4）内皮素能刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加。美容时可以利用注射ET_A达到美白祛斑效果，这是因为ET_A能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上________的结合，抑制了黑色素细胞的增殖和黑色素的形成。

Answer

逆转录酶（反转录酶） cDNA（DNA、脱氧核苷酸） 磷酸二酯 TCGA-（或-AGCT） 两（2、不同） 氨苄青霉素 特异性受体（受体、内皮素受体）

【解析】

基因工程又称基因拼接技术或DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。

基因工程的操作步骤：1.提取目的基因；2.目的基因与运载体结合；3. 将目的基因导入受体细胞；4.目的基因的检测和表达。

（1）过程①根据mRNA合成cDNA，为逆转录的过程，需要逆转录酶的催化。过程①的最后阶段要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是破坏碱基之间形成的氢键，使RNA链和cDNA链分开。

（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯键断开，得到粘性末端，根据限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG，可以看出粘性末端为TCGA-或-AGCT。用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向连接到载体上或防止目的基因和质粒自身环化。

（3）可以看出基因表达载体中的标记基因为抗氨苄青霉素基因，确定是否导入成功可以直接用氨苄青霉素进行检测。

（4）ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上受体的结合，可以减弱内皮素的作用，降低细胞中黑色素的形成，起到美白的作用。