Question

苯酚及其衍生物广泛存在于废水中，对环境有严重危害。下列是某兴趣小组从处理工业废水的活性污泥中分离筛选酚类降解菌株的流程。

请回答下列问题：

（1）富集培养基中需要加入蛋白胨、K₂HPO₄，MgSO₄，苯酚和水等物质，其中可作为碳源的有_____，富集培养的目的：_____________________。

（2）利用苯酚与FeCl₃显紫色制成鉴别培养基，将筛选得到的菌株采用___________法接种到该培养基平板上，培养一段时间，得到如左下图所示结果，你认为，菌株____降解酚类物质能力最强，你的判断依据______________________。

序号	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ
稀释度10^3倍	5	6	3
稀释度10^2倍	43	39	35
稀释度10^1倍	418	511	389

（3）为测定活性污泥中酚类降解菌的数量，取10 g活性污泥，配制成100mL样液于锥形瓶内，充分摇匀，而后再进行系列稀释操作，得到10¹、10²、10³倍的稀释液，并依次分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数(如上表)。则每克活性污泥中酚类降解菌的数量为____个。

Answer

蛋白胨和苯酚 增加苯酚降解菌的数量，以保证能从样品中分离得到目的菌 稀释涂布平板法 ① 菌落相对较小而降解圈较大（或降解圈面积最大） 3.9✖105

【解析】

1.微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。

2.稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。由于两个或多个细胞连在一起，观察到的只是一个菌落，因此其统计的数值往往比实际数目偏低。在统计平板上的菌落数时一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

（1）富集培养基的培养基中含有蛋白胨、K2HPO4，MgSO4，苯酚和水等物质，其中蛋白胨和苯酚可作为碳源，这里通过富集培养能增加苯酚降解菌的数量，从而能保证从样品中成功分离得到目的菌。

（2）利用苯酚与FeCl3显紫色的特性可制成鉴别培养基，将筛选得到的菌株用稀释涂布平板法接种到该培养基平板上，培养一段时间，得到如左下图的结果，若菌株具有降解酚类物质能力且表现的最强，则应该能降解并能更多的降解培养基中的苯酚物质，从而出现透明圈，且透明圈越大表示降解能量越强，即图中的①为目标菌，因为这一菌落相对较小而降解圈较大（或降解圈面积最大）。

（3）为测定活性污泥中酚类降解菌的数量，取10 g活性污泥，配制成100mL样液于锥形瓶内，充分摇匀，而后再进行梯度稀释，得到101、102、103倍的稀释液，并依次分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数，结合分析，根据表中数据需要选择稀释度为102倍的计数结果进行计算。则每克活性污泥中酚类降解菌的数量为（43+35+39）÷3÷0.1×102×10=3.9✖105个（这里的1克土壤相当于10mL培养液）。