Question

微生物产生的脲酶能够特异性分解尿素，在农业、食品加工业和污水处理中用途广泛。例如饮料酒在生产过程中会产生少量尿素，酒体呈酸性，厂家常用脲酶分解酒体中的尿素以改善饮料酒的品质，请回答下列问题：

（1）从土壤中筛选产脲酶菌时，所配制的培养基以____________为唯一氮源，与固体培养基相比，液体培养基更适于富集培养的原因是________________________。

（2）在微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是____________。复筛酸性脲酶菌的培养基为中性固体培养基，以酚红为指示剂，在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多的原因是__________，在挑选时，应选择____________（选填“有红色圈的菌落”或“无红色圈的菌落”）。

（3）在纯化该菌时，为了得到单菌落，常用的接种方法有____________，为了进行计数，某同学吸取菌液lmL稀释1000倍，然后吸取稀释后的菌液0．2mL，接种于固体培养基上培养。一段时间后观察菌落并计数，实验重复三次，得到三个培养皿中菌落数分别是78、88、74，则该菌的浓度是____________个细菌/mL。若需较长时间保存该菌种，可用的方法是____________。

Answer

尿素 培养基与菌体充分接触，菌体繁殖快 防止外来杂菌的入侵 菌液过多会使培养基表面的菌悬液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 无红色圈的菌落 平板划线法和稀释涂布平板法 4×105 甘油管藏法

【解析】

实验室中目的菌株的筛选
①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度。pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。

（1）根据分析可知，要从土壤中筛选产脲酶菌时，在配制的培养基时需要以尿素为唯一氮源，从而达到筛选尿素分解菌的目的，与固体培养基相比，液体培养基能使菌体与营养充分接触，从而能更充分的获取营养，进而有利于菌体繁殖，所以液体培养基更适于富集培养。
（2）涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不宜过多，否则会使培养基表面的菌悬液出现积液，导致菌体堆积，无法达到分离效果，在挑选目标菌种时，由于目的菌不能是酚红指示剂变红，因此应选择无红色圈的菌落。
（3）在纯化该菌时，为了得到单菌落，可用平板划线法和稀释涂布平板法进行接种，为了进行计数，某同学吸取菌液lmL稀释1000倍，然后吸取稀释后的菌液0．2mL，接种于固体培养基上培养。一段时间后观察菌落并计数，实验重复三次，得到三个培养皿中菌落数分别是78、88、74，则该菌的浓度为（78+88+84）÷3÷0.2×1000=4×105个细菌/mL。若较长时间保存该菌种，通常用甘油管藏法保存。