Question

以现有大豆品种作为受体材料，利用基因工程技术，获得转基因植株，分析其对疫霉菌的抗病性，筛选出抗病大豆新株（品）系，请据此回答问题：

（1）基因工程的核心技术是__________，该过程用到的酶__________。

（2）在用土壤农杆菌介导时，往往要用__________处理土壤农杆菌，使之成为__________细胞，然后将它们在缓冲液中混合培养以完成转化过程。

（3）抗性植株的分子生物学检测是基因工程成功与否的重要一环，其中检测目的基因是否表达的方法是：__________，其个体生物学水平上的检测方法为__________。

（4）转基因大豆细胞培养成转基因大豆植株，需要通过的过程是__________，依据的原理是__________。

（5）在基因表达载体中，启动子是__________聚合酶识别并结合的部位。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是__________。

Answer

基因表达载体的构建 限制性核酸内切酶（限制酶）和DNA连接酶 Ca+（CaCl2溶液） 感受态 抗原-抗体杂交 用大豆疫霉菌感染大豆植株，观察其生长状况 植物组织培养 植物细胞的全能性 RNA 大肠杆菌（或细菌）

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，需要限制酶将载体切开以便于目的基因的插入，然后用DNA连接酶将目的基因与载体连接。

（2）利用农杆菌转化法时，将重组质粒导入农杆菌之前，往往需要用Ca2＋处理农杆菌，使之成为感受态细胞，便于重组质粒的导入。

（3）目的基因的表达产物是蛋白质，可以利用抗原–抗体杂交法进行分子水平的检测，也可以采用接种型抗病实验进行个体水平上的鉴定，即用大豆疫霉菌感染大豆植株，观察其生长状况。

（4）将转基因大豆细胞培养成转基因大豆植株，需要利用植物组织培养技术，该技术的原理是植物细胞的全能性。

（5）在基因表达载体中，启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位。原核细胞结构简单，遗传物质少，繁殖快，因此采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的是大肠杆菌。