Question

酸奶是以牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌，经发酵制成的。家庭自制酸奶的安全隐患是有害杂菌的污染问题。为检测自制酸奶是否被杂菌污染，进行如图所示操作。请回答下列问题：

（1）操作中使用的三角瓶和培养基常用的灭菌方法分别是___________、____________。

（2）制备牛肉膏蛋白胨培养基时，操作顺序为计算、称量、________、_______和倒平板。

（3）取最终的牛奶稀释液0．1mL滴在培养基上进行涂布，涂布前要将涂布器__________才能涂布。

（4）在恒温培养箱中培养一段时间后，3个平板上菌落数分别为65个、63个、64个，则可以推测酸奶中每毫升含菌数为_________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是___________________________。

（5）在使用划线接种法纯化乳酸菌的操作中，常使用的接种工具是__________。若培养后获得的某个平板，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落，造成这种现象的操作失误是_____________________________________。

Answer

干热灭菌 高压蒸汽灭菌 溶化 灭菌 灼烧冷却后 6．4×108 有的菌落可能是由2个或多个菌体形成的 接种环 接种环灼烧后未冷却

【解析】

1.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项①倒平板的温 度一般50℃左右适宜，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固；②平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
2.平板划线操作的注意事项①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌；②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；③划线时最后一区域不要与第一区域相连；④划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

（1）对三角瓶的灭菌方法是干热灭菌，对培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
（2）制备牛肉膏蛋白胨培养基时，操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌和倒平板。
（3）稀释涂布平板法中，为了防止杂菌的污染，涂布前要将涂布器灼烧冷却后才能涂布。（4）分析图解可知，酸奶稀释了106倍，在恒温培养箱中培养一段时间后，3个平板上菌落数分别为65个、63个、64个，则可以推测酸奶中每毫升含菌数为=（65+63+64）÷3÷0.1×106=6.4×108个。由于有的菌落可能是由2个或多个菌体形成的，因此运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小。
（5）已知酸奶中的有益菌主要是乳酸菌，进一步分离纯化乳酸菌的方法是挑取乳酸菌菌落在无菌的条件下继续进行培养，该操作中常使用的接种工具是接种环。若在划第二区域时，接种环灼烧后未冷却。则会出现第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。