Question

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O₂和部分CO₂的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

（1）将实验流程图补充完整：A为_______，B为_______。

（2）洗涤红细胞的目的是去除___________，离心速率过快和时间过长会使____一同沉淀，达不到分离的效果。红细胞洗涤干净的标志是_____________。

（3）凝胶色谱柱装填完成后，立即连接缓冲液洗脱瓶，充分洗涤平衡凝胶12小时，其目的是______________。

（4）实验中如何判断色谱柱制作是否成功_____________________________。

（5）判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定，在鉴定的方法中，使用最多的是_________________________。

Answer

血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 杂蛋白(血浆蛋白) 白细胞 离心后的上清液中没有黄色 使凝胶装填紧密 如果红色区带均匀一致的移动，说明色谱柱制作是成功的 SDS---聚丙烯酰胺凝胶电泳

【解析】

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：

（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白；

（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析；

（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质；

（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2、分析题图：A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（1）样品处理过程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析，所以A表示血红蛋白的释放，B表示样品的加入和洗脱。

（2）洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度．重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤干净。

（3）凝胶色谱柱装填完成后，立即连接缓冲液洗脱瓶，充分洗涤平衡凝胶的目的就是是使凝胶装填紧密。

（4）如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀一致的移动，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。

（5）鉴定纯化的蛋白质是否达到要求，常用的方法是SDS---聚丙烯酰胺凝胶电泳。