Question

如图所示，在一段未知序列的突变体 DNA 片段中，插入了已知序列的 T-DNA，要想对 T-DNA 两侧的未知序列进行测序，下列做法正确的是（    ）

A.用引物①和引物④直接进行 PCR 扩增之后在测序

B.用引物②和引物③直接进行 PCR 扩增之后在测序

C.用 DNA 连接酶连接成环状后，再用引物①④PCR 扩增后测序

D.用 DNA 连接酶连接成环状后，再用引物②③PCR 扩增后测序

Answer

C

【解析】

用PCR进行扩增检测时，引物要选在检测序列两侧，并从子链的5‘端开始复制

A，直接选用引物①、④组合进行PCR，引物选择方向相反，无法完成扩增，A错误；
B、D，用引物②和引物③可实现对已知的T-DNA序列进行扩增，达不到预期目的，B、D错误；
C、用 DNA 连接酶连接成环状后，用引物①④PCR 扩增后测序，恰好可扩增出T-DNA两侧的未知序列，C正确；

故选C。