Question

运用转基因技术，将奶牛细胞中编码凝乳酶的基因转移到大肠杆菌细胞中，达到大规模生产凝乳酶的目的。下图表示用作运载体的质粒和目的基因所在DNA片段。下列操作与实验目的不符的是

A. 用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA连接酶构建基因的表达载体

B. 用含氨苄青霉素的培养基筛选出的即为导入目的基因的细菌

C. 可用PCR技术大量扩增目的基因

D. 用Ca²⁺处理大肠杆菌使其易于转化

Answer

B

【解析】

基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。

A、限制酶不能破坏目的基因，也不能破坏质粒上的标记基因，且应该用不同的限制酶进行切割，以防止质粒和目的基因自身的黏性末端连接或防止目的基因与载体反向连接，所以构建图示的重组质粒的酶切位点应该选BamHI、PstI，用DNA连接酶将重组基因连接，正确；

B、运载体和导入目的基因的载体上都存在氨苄青霉素抗性基因，因此不能依此来确定筛选出的是否为导入目的基因的细菌，错误；

C、可用PCR技术大量扩增目的基因，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，正确；

D、用Ca2+处理大肠杆菌增加细菌细胞壁的通透性，使其成为感受态细胞，易于转化，正确。

故选B。