Question

人乳铁蛋白是一种药用保健蛋白。下图表示利用乳腺生物反应器生产人乳铁蛋白的过程，图中Tet^r表示四环素抗性基因，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，五种限制酶的识别序列及切割位点如表所示，请回答以下问题：

（2）据图分析筛选含有重组质粒的受体细胞首先需要在含___________________（填“四环素”“氨苄青霉素”或“四环素或氨苄青霉素”）的培养基上进行，原因是_________________________________。（1）要将人乳铁蛋白基因插入质粒，若只允许使用一种限制酶，应选择的限制酶是_________，酶能起催化作用的原理是_________________________________。

（3）若 BamH I酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为___________，对于该部位，这两种酶___________（填“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）培养出早期胚胎后，科学家欲进行胚胎分割移植，则应该选择发育良好、形态正常的___________，将其移入盛有操作液的培养皿中，然后用分割针进行分割。

Answer

Sau3AⅠ 可以显著降低化学反应的活化能 氨苄青霉素 用限制酶切割后破坏了Tetr基因，但不会破坏Ampr基因，导入重组质粒的受体细胞（对氨苄青霉素具有抗性），能在含氨苄青霉素的培养基上生存下来 都不能 桑椹胚或囊胚

【解析】

题图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的过程，该过程采用了基因工程技术（目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达）、动物细胞培养技术和胚胎移植技术。图中①表示将目的基因导入受体细胞；②表示早期胚胎培养；③表示胚胎移植；④表示产生转基因牛；⑤表示从转基因牛中获取目的基因产物。

（1）根据表中五种酶的识别序列及切割位点可知，限制酶Sau3AI还可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将人乳蛋白基因插入载体，在只允许用一种限制酶酶切载体和人乳铁蛋白基因的情况下，应选择限制酶Sau3AI。酶能起催化作用的原理是酶可以显著降低化学反应的活化能。

（2）据用限制酶Sau3AI切割后会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的受体细胞可能在含有氨苄青霉素的培养基上生存下来。

（3）根据表格中各种限制酶的识别序列和切割位点可知，若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接起来，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶都不能切开。

（4）胚胎分割时，应该选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚。