Question

下图为利用人成纤维细胞(具分裂能力、能在 HAT 培养基上存活)和小鼠骨髓瘤细胞(具分裂能力、不能在 HAT 培养基上存活)进行人类基因定位的操作示意图，请回答相关问题：

（1）图示方法是动物细胞融合技术的应用，该技术的基础是________技术。

（2）操作所用的成纤维细胞应传代____代以内，诱导融合时需要加入的化学促融剂是____。

（3）人、鼠细胞先经过细胞融合形成多核细胞，再经过一次____分裂，形成单核细胞。

（4）HAT培养基起________培养作用，培养时温度应为________℃ ，操作中加入乌本苷的目的是____________。

Answer

动物细胞培养 10 PEG 有丝 选择 36．5±0．5 除去成纤维细胞（或选出杂交瘤细胞）

【解析】

1、分析图示：该技术属于动物细胞融合。2、动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物工程技术的基础。原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡。3、动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞；诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒等。

（1）据图分析，该技术属于动物细胞融合技术；该技术的基础是动物细胞培养技术。
（2）成纤维细胞应传代10代以内；遗传物质没有发生改变的细胞株，诱导融合时需要加入的促融剂是PEG（化学诱导）。
（3）人、鼠细胞先经过细胞膜融合形成多核细胞，经过一次有丝分裂，形成单核细胞。
（4）据题干信息，人成纤维细胞能在HAT培养基上存活，而小鼠骨髓瘤细胞不能在HAT培养基上存活，则HAT培养基起选择培养作用；培养时温度应为36.5±0.5℃（与人的体温相接近）；筛选出人成纤维细胞和成纤维细胞融合的杂交细胞，操作中加入乌本苷的目的是除去成纤维细胞，筛选出杂交细胞。