Question

图甲、乙中的箭头表示三种限制性核酸内切酶的酶切位点，amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列错误的是（    ）

A.在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA

B.在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因

C.图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团

D.导入表达载体的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长

Answer

D

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、在构建重组质粒时，需要选择相同的限制酶切割外源基因和质粒，分析图甲和图乙，质粒和外源基因中相同的限制酶是PstⅠ和HindⅢ，且两种限制酶不会破坏目的基因，并且质粒上能够保留一个完整的标记基因，A正确；
B、在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因，能保留其中的一个，B正确；
C、图甲中的质粒用BamHⅠ（一个切割点）切割后，环状DNA变为链状DNA，故其中含有2个游离的磷酸基团，C正确；
D、用PstⅠ切割后，氨苄青霉素抗性基因被破坏了，导入表达载体大肠杆菌不可以在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。
故选D。