Question

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可通过转基因技术在羊乳中获得。流程如下：

 

（1）上述基因工程中，目的基因是_______；在重组表达载体中有一段特殊的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，这段DNA被称为_____。基因工程所用DNA连接酶有两类，其中只能连接黏性末端的是________DNA连接酶。

（2）常采用PCR技术扩增目的基因，在此过程中，由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA单链，只能从_____端延伸DNA单链，因此需要加入引物。

（3）成熟的基因表达载体除了含有目的基因外，还必须有启动子、终止子以及________________等。

（4）如果将基因表达载体导入大肠杆菌时，一般要用_________处理该菌，使之成为_____________细胞，以便吸收周围环境中的DNA分子。

（5）科研人员通过_____法，将基因表达载体导入猪的受精卵中。可通过______技术，来检测目的基因是否已导入到猪受精卵细胞的DNA分子上。

（6）在操作中要对供体母羊注射__________进行超数排卵处理；应采用____________法使精子体外获能；对供体母羊和__________进行同期发情处理。该转基因母羊进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产htPA，因而被称为________________。

（7）为了获得含有htPA的羊乳，在移植前取早期胚胎滋养层细胞进行_____________。

Answer

人组织纤溶酶原激活物基因(或htPA基因） 启动子 Ecoli 3’ 标记基因 钙离子 感受态 显微注射 DNA分子杂交 促性腺激素 化学诱导(或化学） 代孕母羊(受体母羊） 乳腺生物反应器(或乳房生物反应器） 性别鉴定

【解析】

目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因：DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原-抗体杂交技术。该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植。

（1）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可通过转基因技术在羊乳中获得，所以基因工程中，目的基因是人组织纤溶酶原激活物基因，启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动基因的转录。基因工程所用DNA连接酶有两类，其中只能连接黏性末端的是EcoliDNA连接酶。
（2）在PCR技术扩增目的基因时，由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA单链，只能从3’端延伸DNA单链，因此需要加入引物。
（3）成熟的基因表达载体除了含有目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因。
（4）如果将基因表达载体导入大肠杆菌时，一般要用钙离子处理该菌，使之成为感受态细胞，以便吸收周围环境中的DNA分子。
（5）将基因表达载体导入猪的受精卵中，常用显微注射法。检测目的基因是否已导入到猪受精卵细胞的DNA分子上，常用DNA分子杂交技术。
（6）为了获取更多的卵子，需要使用促性腺激素对母羊进行超数排卵处理，采用化学诱导的方法使精子获能，胚胎移植前需要供体母羊和代孕母羊进行同期发情处理，目的是为供体胚胎的移入提供相同的生理环境。转基因母羊进入泌乳期后，可以通过分泌的乳汁来生产htPA，因而被称为乳腺生物反应器。
（7）为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定。