Question

中国是食醋酿造大国，有几千年的酿醋历史。但目前中国常用的醋酸杆菌菌株AS1.41产酸能力、酒精耐受性均有待提高。拟从醋醅中筛选高产酸、高耐酒精的醋酸菌， 过程如图1所示。

（1）试验中所用培养基均含有水、葡萄糖、酵母浸膏和酒精，其中葡萄糖可为醋酸菌的生长提供_________。配制分离培养基时，除营养物质外，还需要添加2%的碳酸钙和_____，以便观察醋酸与碳酸钙反应后菌落周围形成的透明圈。

（2）分离醋酸菌时，需将富集的醋酸菌培养液进行梯度稀释，采用_____法接种到分离平板上。30℃培养72h后，挑取透明圈_____的单菌落进行划线分离。分离出的单菌落接种到斜面培养基（含3%酒精）上并于4℃保藏。

（3）取保藏的三个菌株分别接种于发酵培养液（含5%酒精）中，30℃培养5d后测产酸量， 筛选出高产酸的醋酸杆菌J2菌株。将J2与AS1.41分别接种到含不同浓度酒精的培养液中，30℃培养24h后测定活菌数量，结果如图2。由图 2 可知，酒精可_____醋酸菌的生长。与 AS1.41 相比，J2 菌株对酒精的耐受性___________。

（4）获得 J2 菌株后，还可以采取_____的育种措施，进一步提高其酒精耐受性。

（5）筛选出 J2 菌株后，其高产酸特性的遗传是否稳定还需检测，请写出基本过程。_____

Answer

碳源和能量 酸碱指示剂 稀释涂布平板 大 抑制 更高 诱变 将J2 菌株连续培养多代，将每一代菌株都接种到培养基上，观察并比较产生的透明圈大小，如果透明圈大小基本一致，说明其高产酸特性能稳定遗传，如果透明圈大小不一致，说明其高产酸特性不能稳定遗传

【解析】

醋酸发酵是利用醋酸菌将葡萄糖或酒精转化为醋酸的过程，检测产酸量时，利用醋酸和碳酸钙反应，会产生透明圈来检测；性状能否稳定遗传，需要根据其后代的性状来判断。

（1）葡萄糖含有碳元素，可以为醋酸菌提供碳源，同时葡萄糖是其呼吸作用的底物，可以提供能量，配制分离培养基时，除营养物质外，还需要添加2%的碳酸钙和酸碱指示剂，以便观察醋酸与碳酸钙反应后菌落周围形成的透明圈；

（2）富集培养后浓度较高，需要梯度稀释，采用稀释涂布平板法接种到分离平板上，30℃培养72h后，挑取透明圈大的单菌落进行划线分离，透明圈越大说明产酸能力越强；

（3）由图 2 可知，加入酒精后，活菌数量相对值都没有不加酒精时高，说明酒精可抑制醋酸菌的生长，J2菌株相对值到酒精浓度为10%时才下降到0，说明J2 菌株对酒精的耐受性更高；

（4）J2 菌株是细菌，可以通过诱变的方式，使其发生基因突变，进一步提高其酒精耐受性；

（5）检测J2 菌株高产酸特性能否稳定遗传，需要检测其后代的产酸能力，所以将J2 菌株连续培养多代，将每一代菌株都接种到培养基上，观察并比较产生的透明圈大小，如果透明圈大小基本一致，说明其高产酸特性能稳定遗传，如果透明圈大小不一致，说明其高产酸特性不能稳定遗传。