新型冠状病毒是一种单链 RNA 病毒，新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光 PCR 鉴定。
（1）首先，从样本中提取病毒RNA，经_____酶作用生成cDNA。然后以cDNA为模板 进行实时荧光PCR扩增，测定样品中病毒核酸量。
（2）通过实时荧光PCR扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针（一小段单链DNA，可与目的基因中部序列特异性结合）。当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到（如图 1）。
① 当样本中有目的基因时，引物和探针与目的基因退火，通过形成_____而特异性结合。
② 在 PCR 循环的_____阶段，TaqDNA 聚合酶催化子链的合成并水解探针。检测到的荧光强
（3）在通过实时荧光 PCR 检测新型冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图 2 所示。
① 与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，原因有_____。
② Ct 值的含义：在 PCR 扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。因此，当样本中初始模板越多时，Ct 值就_____。
③ 某新型冠状病毒核酸检测说明书标明，Ct≤37 判定为阳性，Ct>40 或无 Ct 值判定为阴性。图 2 所示新型冠状病毒核酸检测结果应判定为_____。
（4）阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染。可能产生假阴性的因素有_____。
a．取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光 PCR 检测阈值
b．样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解
c．病毒发生变异
禾谷镰刀菌可侵染小麦等作物，使其产量和品质下降。研究者通过构建融合基因 Ve-FG 并转化拟南芥，以期实现转基因植物抗禾谷镰刀菌的目的。
（1）利用 PCR 技术，将野生番茄的抗黄萎病基因 Ve 与禾谷镰刀菌的识别基因 FG 进行重组，构建融合基因 Ve-FG（如图 1）。
① 设计 3 对引物。其中引物 2 的一部分序列与 C 片段一部分序列互补，另一部分序列与_____片段一部分序列互补。
② 通过 PCR 分别克隆A、C、P 片段。克隆 A 片段应选用的引物是_____。
③ 以 A、C、P 片段为_____进行延伸，将 A、P、C 片段拼接，再以引物 1、4 进行 PCR，扩增融合基因 Ve-FG。
（2）用_____将 Ve-FG 与质粒连接，构建重组质粒（如图 2，图中潮霉素抗性基因只在植物细胞中表达）。将农杆菌与重组质粒混合，一段时间后涂布到含有_____的平板培养基上进行筛选。用含重组质粒的农杆菌转化拟南芥，几周后收获种子，种在含有潮霉素的培养基上，获得转基因拟南芥株系 1 和株系 2。
（3）分别提取株系 1 和 2、非转基因拟南芥植株叶片中的 DNA 作为模板，PCR 扩增 Ve-FG 基因后进行电泳，结果如图 3。
① 电泳时应以_____为阳性对照。
② 成功导入 Ve-FG 基因的是_____。
③ 株系 1 可抗潮霉素，但电泳结果无阳性条带，原因可能是_____。
（4）为检验融合基因 Ve-FG 的功能，以导入 Ve-FG 基因的植株为实验组，导入空白质粒的植株为对照组，分别接种_____。一段时间后观察发现，与对照植株相比，实验组整体长势更旺盛，叶片萎蔫程度、叶片变黄程度也较轻，这表明_____。
目前流感疫苗主要的生产介质是鸡胚。研究者用犬肾细胞（MDCK 细胞）培养流感病毒，制备疫苗并测定了其免疫效果。
（1）利用合成培养基培养细胞时，培养基中需加入水、葡萄糖、_____、维生素、无 机盐等营养物质。为防止污染，需对培养液和所有培养用具进行_________处理，以及在无菌环境下进行操作。
（2）将贴壁生长型 MDCK 细胞进行驯化，可使之适应悬浮培养。与贴壁培养相比，悬浮培养利于提高细胞密度，传代培养时不需要用_____消化，操作更简单。
（3）通过克隆化培养，获得若干单克隆细胞株。需要从这些单克隆细胞株中筛选出高产流感病毒的细胞株，请写出筛选的思路_____。
（4）用 MDCK 细胞培养甲型 H1N1 流感病毒，制成疫苗后对小鼠进行免疫接种（第一次免疫两周后进行第二次免疫）。第二次免疫后两周接种甲型 H1N1 流感病毒，测定免疫效果，结果如图 1、图 2。
① 由图 1 可知，用两种疫苗免疫小鼠，均可产生较高水平的抗体，说明两种疫苗均可激发小鼠对流感病毒的_____免疫应答。
② 由图 2 可知，两种疫苗都对小鼠有较好的_____作用。
花椰菜和黑芥均为十字花科植物，花椰菜易患黑腐病（致病菌为黄单胞杆菌属细菌）。拟通过植物体细胞杂交技术（如图1），将黑芥的抗黑腐病基因引入到花椰菜中。
（1）在用酶解法制备原生质体时，需先用较高渗透压的溶液处理植物细胞，使细胞处于微弱的_____状态，然后用_____消化去除细胞壁，获得原生质体。
（2）用不同剂量紫外线处理黑芥原生质体，统计愈伤组织数和再生植株率，结果如图2。由图2可知，处理黑芥原生质体的适宜紫外线剂量为_____J·cm-2， 此处理下融合细胞的_____能力较强，既能得到大量愈伤组织，再生植株率也最高。
（3）杂种细胞经组织培养发育成植株，该过程所用培养基中包括水、无机盐、有机营养等营养物质，此外还需加入一定浓度和比例的_____，以调节细胞的发育方向。
（4）杂种细胞分裂过程中会丢失来自黑芥的部分染色体，有时会发生染色体易位，这使杂种植株染色体组成呈现多样性。如何对杂种植株进行选择和培育，才能得到既抗黑腐病、又最大程度减少非目标性状的花椰菜植株？请写出基本思路。_____
中国是食醋酿造大国，有几千年的酿醋历史。但目前中国常用的醋酸杆菌菌株AS1.41产酸能力、酒精耐受性均有待提高。拟从醋醅中筛选高产酸、高耐酒精的醋酸菌， 过程如图1所示。
（1）试验中所用培养基均含有水、葡萄糖、酵母浸膏和酒精，其中葡萄糖可为醋酸菌的生长提供_________。配制分离培养基时，除营养物质外，还需要添加2%的碳酸钙和_____，以便观察醋酸与碳酸钙反应后菌落周围形成的透明圈。
（2）分离醋酸菌时，需将富集的醋酸菌培养液进行梯度稀释，采用_____法接种到分离平板上。30℃培养72h后，挑取透明圈_____的单菌落进行划线分离。分离出的单菌落接种到斜面培养基（含3%酒精）上并于4℃保藏。
（3）取保藏的三个菌株分别接种于发酵培养液（含5%酒精）中，30℃培养5d后测产酸量， 筛选出高产酸的醋酸杆菌J2菌株。将J2与AS1.41分别接种到含不同浓度酒精的培养液中，30℃培养24h后测定活菌数量，结果如图2。由图 2 可知，酒精可_____醋酸菌的生长。与 AS1.41 相比，J2 菌株对酒精的耐受性___________。
（4）获得 J2 菌株后，还可以采取_____的育种措施，进一步提高其酒精耐受性。
（5）筛选出 J2 菌株后，其高产酸特性的遗传是否稳定还需检测，请写出基本过程。_____
生物技术给人类带来福祉的同时，也引起人们对其安全性和伦理问题的关注。我国政府反对（ ）
A.生产任何转基因产品
B.生产、储存生物武器
C.人类胚胎干细胞研究
D.生殖性克隆动物
