Question

海洋藻类上常附着有多种微生物，其中部分在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，而部分会产生某些毒素污染环境或毒害动物，人们需要对它们进行大量的研究。请回答下列问题：

（1）若要将微生物采用平板划线法进行分离操作，正确的是图______。

（2）长期保存菌种时，应将培养的菌液与___________充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱保存，丢弃已经接种过微生物的培养基前，往往需要先行灭菌，以免____________。

（3）用稀释涂布平板法测定某种微生物的数量，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测的方法是____________________________________。

稀释涂布平板法统计的菌落数往往比样品中活菌的实际数目要低，这是因为_______。

（4）鉴别培养基中需加入_________才能对微生物中的纤维素分解菌加以筛选。鉴别培养后，培养基中出现了几个以菌落为中心的透明圈，根据___________________（填 “菌落直径”、“透明 圈直径”或“透明圈直径/菌落直径”）的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（5）发酵工程常常需要对某些微生物进行固定化，最常用的方法是______________ 法。某真菌产生的油脂不易挥发，可选用_____________（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取，其提取效率主要取决于_________________________。

Answer

B 灭菌的甘油 以免污染环境或者对其他生物产生毒害 将未接种的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落出现 当两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落 刚果红 透明圈/菌落直径 包埋法 萃取法 萃取剂的性质和使用量

【解析】

1、菌种保存

临时保存法

甘油管藏法

适用对象

频繁使用的菌种

长期保存的菌种

培养及类型

固体斜面培养基

液体培养基

温度

4℃

-20℃

方法

菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上

将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存

缺点

菌种易被污染或产生变异

\\

2、在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

3、从土壤中分离纤维素分解菌的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；筛选纤维素分解菌需要用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，纤维素分解菌可以用刚果红染液进行鉴别，在培养基中加入刚果红染液，在其菌落周围会出现透明圈。

（1）采用平板划线法进行分离操作时，每次划线都要从上一次划线的末端开始，且首尾不能相连，故选B。

（2）长期保存菌种时，应将培养的菌液与灭菌的甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱保存；丢弃已经接种过微生物的培养基前，往往需要先行灭菌，以免以免污染环境或者对其他生物产生毒害。

（3）培养某种微生物时，在接种前要检测培养基是否被污染。采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。稀释涂布平板法可以通过统计菌落数来估算样品中的活菌数，但菌落数往往比实际细菌数要低，原因是用稀释涂布平板法统计菌落数目时，有些细菌聚集在一起，形成一个菌落，这样统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。

（4）鉴别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，通过微生物产生的某种代谢产物与其反应产生明显的特征变化而加以筛选，对纤维素分解菌加以筛选时通常需要加入刚果红；使用刚果红染色法时，纤维素酶作用的透明圈的直径与菌落直径比越大，酶活性越强，故根据透明圈直径/菌落直径的大小可初步筛选出高效纤维素分解菌。

（5）固定化酶和固定化细胞技术是指利用物理或化学方法，将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。对微生物进行固定，最常用的方法是包埋法；对于不易挥发的某真菌产生的油可选用萃取法从菌体中提取。其提取效率主要取决于萃取剂的性质和使用量。