Question

运用转基因技术，将奶牛细胞中编码凝乳酶的基因转移到大肠杆菌细胞中，达到大规模生产凝乳酶的目的。如图表示用作运载体的质粒和目的基因所在DNA片段。下列操作与实验目的不符的是（    ）

A.用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA连接酶构建基因的表达载体

B.用含氨苄青霉素的培养基筛选出的即为导入目的基因的细菌

C.可用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞

D.用Ca²⁺处理大肠杆菌使其易于转化

Answer

B

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、由于EcoRI会破坏外源DNA中的目的基因，所以用限制酶BamHI、PstI和DNA连接酶构建基因的表达载体，A正确；
B、在形成重组质粒时，破坏了抗四环素基因，但抗氨苄青霉素基因完好，因此成功导入重组质粒的理想大肠杆菌在含氨苄青霉素的培养基上能正常生长，在含四环素的培养基上不能正常生长，所以只用含氨苄青霉素的培养基筛选出的不一定为导入目的基因的细菌，也可能是导入普通质粒的细菌，B错误；
C、可用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞，C正确；
D、将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca2+处理细胞，使之成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，D正确。
故选B。