Question

神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。

（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用____________技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。 给小鼠注射重组的人____________蛋白后，将小鼠产生免疫反应的B细胞与__________融合，制备杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养， 吸取培养孔中的__________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用____________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得 NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 Mab）。

（2）提取正常组织细胞和MCF7细胞的总蛋白，设置空白对照，加入NRP-1 Mab进行蛋白质免疫印迹（将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到膜上，然后用特异性抗体检测抗原的技术），实验结果如下：

 

该实验结果说明了____________________________________。

（3）将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的肿瘤体积，如下图所示。

对照组注射________，从上图中可以看出________________________。

（4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 Mab抑制肿瘤的作用机理是________。

Answer

动物细胞培养技术 神经纤毛蛋白-1（NRP-1） 骨髓瘤细胞 上清液 抗原—抗体杂交技术 NRP-1在MMCF7细胞中高表达 等量的生理盐水 NRP-1 Mab能够有效地降低肿瘤的体积，中、高浓度抗体的降低效果比低浓度的效果更显著。 NRP-1在MMCF7细胞中高表达，NRP-1 Mab与NRP-1 特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1 的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。

【解析】

动物细胞融合，又称细胞杂交，指将两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。

单克隆抗体制备的过程中需要经过两次筛选，第一次用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；第二次用专一抗体检测筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶进行分散处理后，运用动物细胞培养技术获得MCF7细胞。要制备NRP-1单克隆抗体，需要用重组的人NRP-1蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，产生相应的浆细胞，让该浆细胞与骨髓瘤细胞进行融合处理，制备杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，可以从培养液即上清液中提取到单克隆抗体，可以用抗原——抗体杂交技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得NRP-1单克隆抗体（NRP-1 Mab）。

（2）根据实验结果可知，只有MCF7细胞中蛋白可以与NRP-1 Mab发生免疫反应，说明NRP-1在MCF7细胞中高表达。

（3）实验的自变量是给药的剂量和时间，因变量是肿瘤的体积，对照组应该注射等量的生理盐水，根据实验结果可知，NRP-1 Mab能够有效地降低肿瘤的体积，中、高浓度抗体的降低效果比低浓度的效果更显著。

（4）根据“神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成”及实验数据NRP-1Mab能够有效地降低肿瘤的体积可知，NRP-1在MCF7细胞中高表达，NRP-1Mab与NRP-1特异性结合，阻断了血管内皮生长因子与NRP-1的结合，抑制了肿瘤血管生成，进而降低了肿瘤的体积。