Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）分离以尿素为氮源的微生物时，同学们各自将取来的菌液稀释至10^-5倍后在培养皿中进行培养，A同学培养皿中得到约150个菌落，其他同学的培养皿中得到大约50个菌落，各位同学实验后均剩余少量空白平板。请回答：

（1）微生物实验中各种实验器皿高压蒸汽灭菌后，通常需要将其放入________℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。实验操作前，应将需要使用的器皿从烘箱中取出，放到超净台上，打开紫外灯和________，灭菌30min。

（2）同学们在此实验中使用的微生物分离方法称为______________，该分离方法通常以每个培养皿中有__________个以内的菌落最为合适。在培养基中加入酚红可以对此实验中分离的微生物进行鉴定，原因是______________。

（3）同学们对实验结果进行分析后认为，导致A同学实验结果的可能原因是培养基配制时没有用___________替换琼脂，或者是培养基配制时被杂菌污染了。证明A同学的培养基是否被杂菌污染的方法是___________。

（二）回答下列与现代生物技术有关的问题：

（1）某农户建立了小型的“蔬菜-鸡、猪-沼气”人工生态系统。此系统可称为___________生态工程，属于小型农业生态工程，在分析该生态系统的经济效益时，除了考虑系统内部的投入与产出、系统的实际消费外，还需考虑系统的有效贡献，也就是系统____________。

（2）利用一定的技术可以将两个或多个细胞融合成一个细胞，上世纪80年代发明的____________技术，是效率很高的新型细胞融合技术。基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定蛋白质减少的对应关系可以进行____________。

（3）用噬菌体抗体库技术可获得人单克隆抗体，该技术的原理是将人抗体基因插入噬菌体载体，让重组噬菌体侵染大肠杆菌并合成抗体。获取人抗体基因时，可从人的____________细胞中获取RNA，再通过逆转录获得抗体基因。由于噬菌体能自主吸附并将DNA分子注入大肠杆菌，理论上可以不使用____________处理大肠杆菌。为保证合成的抗体以分泌蛋白的形式分泌出大肠杆菌，抗体基因与噬菌体基因间需设计一个____________密码子的对应序列，否则，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面。

Answer

60〜80℃ 过滤风 （稀释）涂布分离法 20 细菌产生的脲酶能将尿素分解产生氨，使培养基pH升高 琼脂糖 将A同学剩余的平板放入无菌培养箱中培养，观察是否长出菌落 庭院 对系统外部的物质输出 电融合 基因定位 效应B（浆） CaCl2 终止

【解析】

（一）微生物的分离培养技术，需要掌握无菌操作，稀释涂布平板法等。

（二）现代生物技术包括基因工程、细胞工程、胚胎工程、生态工程等，本题考查相关的原理和应用。

（一）

（1）微生物实验中各种实验器皿高压蒸汽灭菌后，通常需要将其放入60〜80℃℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。实验操作前，应将需要使用的器皿从烘箱中取出，放到超净台上，打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。这些都属于无菌操作要求。

（2）将菌种稀释后再用涂布器涂布到培养基上分离培养的方法称为（稀释）涂布分离法，该分离方法通常以每个培养皿中有20个以内的菌落最为合适。细菌产生的脲酶能将尿素分解产生氨，使培养基pH升高，使分解尿素的细菌产生红色菌落。

（3）培养基配制时没有用琼脂糖替换琼脂，或者是培养基配制时被杂菌污染了都会使菌落数目增多。通过将A同学剩余的平板放入无菌培养箱中培养，观察是否长出菌落可以证明其培养基是否被杂菌污染。

（二）

（1）这种人工系统可根据其位置称为庭院生态工程。系统的有效贡献，也就是系统对系统外部的物质输出。

（2）电刺激融合技术，是效率很高的新型细胞融合技术。根据丢失的染色体与特定蛋白质减少的对应关系可以将表达特定蛋白质的基因位置定位在丢失的染色体上。

（3）人浆细胞可以分泌抗体，因此可以从中获取模板mRNA，再通过逆转录获得抗体基因。CaCl2处理大肠杆菌是为了使外源性DNA更容易进入大肠杆菌细胞内由，由于噬菌体能自主吸附并将DNA分子注入大肠杆菌，理论上则可以不使用CaCl2处理。设计一个终止密码子的对应序列，可以避免抗体与病毒蛋白形成融合蛋白附着在噬菌体表面。