Question

研究人员将鱼的抗冻基因导入番茄体内，获得抗冻能力明显提高的番茄新品种。下列操作 合理的是（    ）

A.若目的基因的获取用双酶切处理获得，则载体质粒就不必用两种酶进行切割处理

B.利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶构建基因表达载体

C.将基因表达载体导入番茄体细胞之前需用Ca²⁺处理细胞

D.运用DNA分子杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达

Answer

B

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、若目的基因的获取用双酶切处理获得，则载体质粒也需要用两种酶进行切割处理，以产生相同的黏性末端，A错误；

B、利用限制性核酸内切酶和DNA连接酶构建基因表达载体，B正确；

C、将基因表达载体导入微生物细胞之前需用Ca2+处理细胞，使之成为感受态细胞，C错误；

D、基因表达的产物是蛋白质，因此运用抗原-抗体杂交技术检测抗冻基因是否在番茄细胞中表达，D错误。

故选B。