Question

噬菌体抗体库技术是指将人的全部抗体基因插入噬菌体的基因组中，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，最终使抗体以复合蛋白的形式表达于噬菌体的表面，形成含有全套抗体谱的噬菌体抗体库。请问答下列问题：

（1）人体内的抗体在合成后，以_____________的方式分泌到内环境中。

（2）若要获取人的抗体基因，可以从细胞中提取相应的RNA，通过逆转录过程获取_____________片段，再合成目的基因。目的基因可以通过PCR技术扩增，PCR技术的全称是_____________。

（3）构建重DNA分子的目的是__________________________。在噬菌体抗体库的构建过程中，

_____________（填“需要”或“不需要”）利用CaCl₂处理大肠杆菌以制备感受态细胞，理由是_____________。

（4）检测大肠杆菌转录出的相应RNA时，应先从细胞中提取其RNA，再以_____________为探针，与RNA杂交，该技术的原理是_____________。

Answer

胞吐 cDNA 多聚酶链式反应 使人的抗体基因在大肠杆菌细胞中稳定存在，遗传并表达 不需要 噬菌体可以侵染大肠杆菌，将重组DNA分子注入大肠杆菌 放射性同位素标记的目的基因（或抗体基因） 碱基互补配对

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）抗体是分泌蛋白，从细胞分泌至内环境的方式是胞吐作用。

（2）以RNA为模板逆转录获取cDNA；PCR技术的全称是多聚酶链式反应。

（3）构建重组DNA分子的目的是使人的抗体基因在大肠杆菌细胞中稳定表达，并能传递给下一代。噬菌体可以侵染大肠杆菌，将重组DNA分子注入大肠杆菌，因此在噬菌体抗体库的构建过程中，不需要利用CaCl2处理大肠杆菌以制备感受态细胞。

（4）检测目的基因是否转录出的相应RNA应采用分子杂交技术，即从原核细胞中提取RNA，以用放射性同位素标记的目的基因（放射性同位素标记的抗体基因）为探针，与RNA杂交。该技术的原理是碱基互补配对。