Question

下图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，请回答下列问题：

（1）图中选择培养基应以_________为唯一氮源，鉴别培养基还需添加_________作指示剂。

（2）对土壤样品溶液逐级稀释的目的是__________________，对获得的菌种采用_________的方法进行长期保存。

（3）在3个培养基平板上，分别接种0.1mL稀释倍数为10⁵的土壤样品液，平板上长出的细菌菌落数分别为39、48和42。该过程采取的接种方法是_________，每毫升土壤样品液中的细菌数量为_________个。用此计数方法测得的细菌数比实际细菌数要_________，原因是____________________________________。

Answer

尿素 酚红 获得单个细菌（或单个菌落） 甘油管藏 稀释涂布平板法 4.3×107 少 当两个或多个细菌细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落

【解析】

1、由于细菌分解在尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，可在培养基中加入酚红指示剂，尿素被分解后产生氨，PH升高，指示剂变红。
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）产脲酶的细菌为尿素分解菌，因此图中选择培养基应以尿素为唯一氮源；由于细菌在分解尿素的过程中合成脲酶，脲酶将尿素分解成氨，会使培养基碱性增强，PH升高，所以可以用检测pH的变化的方法来判断尿素是否被分解，鉴别培养基还需添加酚红作指示剂。

（2）对土壤样品溶液进行逐级稀释，然后进行涂布平板，其目的是获得单个细菌（或单个菌落）；对获得的菌种可以采用甘油管藏的方法进行长期保存。

（3）结合题干实验过程、结合图示分析，图中菌落在平板上均匀分布，判断该过程采取了稀释涂布平板法；在3个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为39、48、42三个平板符合计数要求，所以每克土壤样品中的细菌数量=（39+48+42）÷3÷0.1×105= 4.3×107个；用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏低。