Question

下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是__________，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经__________处理的处于__________态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用__________方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bc1 I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为__________，对于该部位，这两种酶__________（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

Answer

BcI I和Hind III DNA连接 Ca2+（CaCl2） 感受 四环素 抗原—抗体杂交 都不能 7

【解析】

选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，据表中的酶切位点可知，BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选Bcl I和Hind Ⅲ两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过连接酶作用后获得重组质粒，为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。

（1）据图中信息，质粒的四环素抗性基因和氨苄青霉素抗性基因中都存在BamHⅠ的酶切位点，因此不能选择BamHⅠ进行酶切；目的基因的两端和载体上都有BclⅠ酶和Hind Ⅲ的酶切位点，因此用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，应选用BclⅠ酶和Hind Ⅲ酶同时对目的基因和质粒进行酶切，再用DNA连接酶进行连接。为了扩增重组质粒，需将其转入经 Ca2+（CaCl2）处理的处于感受态的大肠杆菌。

（2）因构建重组质粒时，目的基因的插入破坏了氨苄青霉素抗性基因，但四环素抗性基因却保持其结构的完整性，为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用抗原-抗体检测。

（3）根据表格分析可知，经BamHⅠ酶切割后产生的黏性末端为，BclⅠ切割后露出的黏性末端是，即BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同，可直接被DNA连接酶连接，但用该DNA连接酶连接所形成的重组DNA的相应核苷酸序列是，该核苷酸序列不能被BclⅠ和Hind Ⅲ识别切割，因此BclⅠ和Hind Ⅲ都不能切开连接的部位。

（4）依据表中Sau3A I的酶切位点可知，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，假设完全酶切可得到A、B、C三种片段；若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。