Question

基因和表达载体相连时既可以正向连接也可以反向连接。下图甲、乙分别表示某质粒、含目的基因和酶切位点的DNA片段，构建基因表达载体时应用酶B和酶C进行切割，不应用酶A切割运载体和DNA片段，其原因不包括（    ）

A.防止目的基因和运载体发生反向连接 B.保证构建的重组质粒中含有标记基因

C.防止目的基因或运载体重新自身环化 D.保证构建的重组质粒中含有启动子

Answer

D

【解析】

基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。一个基因表达载体的组成，除目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因等。分析图示可知，目的基因两端有酶A、酶B和酶C的切割位点，而质粒中，酶A的切割位点位于氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因上，酶B和酶C的切割位点位于四环素抗性基因上。

A、质粒和含目的基因的DNA片段上都有酶B和酶C的酶切位点，酶B和酶C切割后产生的黏性末端不同，可以防止目的基因和运载体发生反向连接，A正确；

B、用酶B和酶C进行切割后，重组质粒中还含有氨苄青霉素抗性基因可作为标记基因，若用酶A切割，质粒中的两个标记基因都会被破坏，B正确；

C、酶B和酶C切割后产生的黏性末端不同，可防止目的基因或运载体重新自身环化，C正确；

D、无论用哪种酶切都不会破坏质粒中的启动子，重组质粒中都含有启动子，D错误。

故选D。