Question

重组人血小板生成素（rhTPO）是一种造血生长因子，如图是科学家培育乳汁中含有rhTPO的羊的相关过程。请回答下列相关问题。

（1）利用PCR技术对目的基因进行扩增时，利用的原理是__________。设计引物是PCR技术的关键之一，某同学根据已知的rhTPO基因的核苷酸序列设计的两对引物如下图所示，其中引物对__________（填“A”或“B”）设计不合理，原因是__________。

引物对A	P1   GTCCGCTAGTGGCTGTG P2   AGCTGGCGTTTAGCCTG
引物对B	S1   AAGCCGGGCGCGCGGAA S2   TTCGGCCCGCGCGCCTT

（2）HindIII和XhoI两种限制酶切割出的黏性末端不同，将含有rhTPO基因的DNA片段和质粒都通过HindIII和XhoI切割，可以避免__________。拼接成重组质粒时，需要加入__________酶才能完成。rhTPO基因能否在羊受精卵细胞中稳定遗传的关键是__________。

（3）通常需要在胚胎移植前对早期胚胎进行性别鉴定，应从发育到__________时期的胚胎的__________中取样做DNA分析性别鉴定。

（4）为了使rhTPO基因只在羊乳腺细胞中表达，在构建基因表达载体时需要在rhTPO基因前端加上__________。移植的胚胎可以在受体母羊中存活的原因是__________。

Answer

DNA双链复制 B S1、S2能互补配对，可能会失去引物与模板链结合的机会 目的基因或质粒的自身环化 DNA连接 rhTPO基因是否插入羊受精卵细胞的染色体DNA（细胞核DNA） 囊胚 滋养层 羊乳腺蛋白基因的启动子 受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因：DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA：分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原―抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）PCR技术的原理是DNA双链复制；引物不能互补配对，而表中S1、S2能互补配对，这样可能会失去引物与模板链结合的机会，因此引物对B设计不合理。

（2）用HindⅢ和XhoI两种限制酶切割含有rhTPO基因的DNA片段和质粒可以避免目的基因或质粒的自身环化。将目的基因与运载体连接形成重组质粒时，需要DNA连接酶。目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是：目的基因是否插入羊受精卵细胞的染色体DNA上。

（3）对早期胚胎进行性别鉴定时，应从发育到囊胚时期的胚胎的滋养层中取样，做DNA分析性别鉴定。

（4）为了使rhTPO基因只在羊乳腺细胞中表达，在构建基因表达载体时需要在rhT-PO基因前端加上羊乳腺蛋白基因的启动子。移植的胚胎可以在受体母羊中存活的原因是受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应。