Question

下图为希望导入植物细胞的重组DNA分子，箭头代表PCR扩增时子代DNA的延伸方向，T- DNA片段基因序列已知，设计四段T- DNA的引物A、B、C、D，若利用PCR技术扩增T- DNA片段和未知基因片段，可选择作为引物的分别是

A.A、D， B、C

B.A、B， C、D

C.B、D，A、C

D.C、D，A、B

Answer

A

【解析】

DNA聚合酶不能直接启动DNA新链的合成，即不能从头合成DNA，只能在有引物的3’－OH上聚合核苷酸来延伸DNA链。原因是在新链的延伸过程中，只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸，否则延伸终止，启动切除修复机制，直至添加正确的碱基，也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA－DNA）才能继续下游DNA的合成，这是它的忠实性和高保真系统决定的。DNA的复制必须先借助于RNA聚合酶以DNA为模板合成一小段引物RNA，然后DNA聚合酶再接着进行DNA合成。最后，引物RNA由DNA聚合酶水解后，替换上相应的DNA片段，最后由DNA连接酶把片段完整连接起来。

DNA的两条链为反向平行螺旋在一起，由于DNA聚合酶只能在有引物的3’端上聚合核苷酸来延伸DNA链，而图示中箭头代表PCR扩增时子代DNA的延伸方向，所以引物A是顺时针方向，那么，C也是顺时针方向，B、D就是逆时针方向。所以利用PCR技术扩增T- DNA片段时需要的引物为A、D,而扩增被插入的基因片段需要利用B、C这对引物，综上分析，A正确，BCD错误。

故选A。