Question

腺病毒为双链DNA病毒，具有很高的致病性，我国科学家研发的腺病毒载体重组新冠病毒疫苗进展顺利，该疫苗以改造过的复制缺陷型腺病毒为载体，搭载上新冠病毒的S基因，进入受试者体内，使人体产生对S蛋白的免疫记忆。回答下列问题：

（1）新冠病毒为RNA病毒，获得新冠病毒的S基因的过程一般为提取病毒RNA，通过________过程获取相应DNA，构建_______文库，PCR技术扩增得到S基因。

（2）基因工程的核心，即实施基因工程的第二步是_____________；若选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割，目的是________________；基因工程中常用的DNA连接酶有两种，分别是________和__________，后者既能连接平末端又能连接黏性末端。

（3）疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止____________________，进而提高疫苗的安全性。

（4）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么这一启示是______________________________________________________。

Answer

逆转录 cDNA 基因表达载体的构建； 防止S基因与载体错误连接（防止S基因自身环化、防止S基因与运载体反向连接） E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 病毒在人体内进行增殖 DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物体

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因-DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA-分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）新冠病毒为RNA病毒，获得新冠病毒的S基因的过程一般为提取病毒RNA，在逆转录酶的作用下，通过逆转录过程获取相应DNA，构建cDNA，再经过PCR技术扩增得到S基因。
（2）基因工程的核心是基因表达载体的构建，若选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割，目的是防止S基因与载体错误连接，基因工程中常用的DNA连接酶有两种，分别是E•coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。
（3）疫苗制备中选取复制缺陷型腺病毒作为载体可以防止病毒在人体内进行增殖，进而提高疫苗的安全性。
（4）肺炎双球菌转化实验中，S型菌的DNA进入R型菌中并能表达，说明DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体，为基因工程理论的建立提供了启示。