Question

由腊梅凝集素基因控制合成的某种蛋白质能与蚜虫肠道黏膜上的受体结合，从而抑制蚜虫吸收营养物质。通过基因工程将腊梅凝集素基因转入烟草，可增强其抗蚜虫的能力。请回答下列问题：

（1）以腊梅凝集素基因产生的mRNA作为模板，在_______________酶的作用下，按照_______________原则获得cDNA片段，以获取目的基因。

（2）为增加目的基因的数目，可用PCR技术进行扩增。PCR扩增之前，需要设计一对与目的基因两端序列互补配对的引物，若根据腊梅凝集素基因控制合成的蛋白质的氨基酸序列设计引物，引物的序列可以有多种，原因是_______________。

（3）在PCR反应体系中，除具备缓冲液、模板DNA分子和引物外，还应有_______________。

（4）将目的基因导入烟草细胞常用的方法是农杆菌转化法。农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有________________________的特点。在该过程中需要添加酚类物质，目的是________________________。

Answer

逆转录 碱基互补配对 一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种 四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶 可转移至受体细胞并且能整合到烟草细胞中染色体的DNA上 吸引农杆菌感染烟草细胞

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

（1）逆转录是指在逆转录酶的作用下，以mRNA作为模板按照碱基互补配对原则获得cDNA片段，再来制取目的基因片段。

（2）由于密码子具有简并性，即一种氨基酸可能有多种密码子，对应生物DNA碱基序列就会有多种，所以引物的序列可能有多种；

（3）PCR反应体系中，需要有缓冲液、模板DNA分子、引物、四种脱氧核苷酸作为原料、耐热的DNA聚合酶（Taq酶）。

（4）农杆菌的Ti质粒上的T-DNA具有可转移至受体细胞并且能整合到烟草细胞中染色体的DNA上的特点。在该过程中需要添加酚类物质，目的是吸引农杆菌感染烟草细胞。