Question

为调查某地土质状况，科研小组对该地土壤中分解尿素的细菌进行了分离和纯化培养。请回答下列问题：

（1）培养基的常用灭菌方法是______________________________，倒平板时培养基的温度不能太低，原因是______________________________。

（2）该研究小组将10g土样进行梯度稀释，在某个稀释度下涂布接种了3个平板（接种量均为0．1mL），经适宜培养后，3个平板均没出现菌落，分析可能的原因是________________。分析原因后，科研小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，推测最可能的原因是_______________。

（3）科研小组从同一平板中挑选出A、B、C三种菌落进行梯度稀释并分别涂布接种在分解尿素的细菌的选择培养基上，经适宜培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落。由此可得出的结论是____________________。推测C种细菌与A、B在同一个平板上能生长繁殖的可能原因是______________________________。

（4）在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止______________________________。

Answer

高压蒸汽灭菌法 温度太低使培养基凝固，无法铺展均匀 稀释度过高(或涂布器灼烧后没冷却) 该土样中有多种细菌能分解尿素 C种菌落的细菌不能分解尿素 C种菌落的细菌可从A或B菌落的代谢产物中获得氮源 因培养时间不足导致遗漏细菌数目

【解析】

1.微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2.统计菌落数目的方法：
（1）显微镜直接计数法 ：
①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；
②方法：用计数板计数；
③缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法（活菌计数法） ：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数；③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）无微生物培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；温度太低会使培养基凝固，无法铺展均匀，所以倒平板时培养基的温度不能太低。

（2）根据题意分析，该研究小组接种了三个培养基，经适宜培养后均没出现菌落，其可能的原因是稀释度过高或涂布器灼烧后没冷却；之后，该研究小组用先前制作的未使用的平板重新涂布接种完成实验，在另外某个稀释度下涂布接种的3个平板，经适宜培养后均存在多种不同特征的菌落，说明该土样中应该有多种细菌能分解尿素。

（3）根据题意分析，在分解尿素的细菌的选择培养基上，对三种菌落进行分别接种和适宜的培养后，均能检测到A、B菌落却始终检测不到C种菌落，说明C种菌落的细菌不能分解尿素；C种细菌与A、B在同一个平板上能生长繁殖，说明C种菌落的细菌可从A或B菌落的代谢产物中获得氮源。

（4）在实验中，研究者每隔24小时统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足导致遗漏细菌数目。