Question

下图是制备抗埃博拉病毒VP40蛋白的单克隆抗体的过程

（1）过程①中选用EcoRⅠ和XhoⅠ两种限制酶切割的优点是_________，此外还要用到________酶。

（2）过程②中首先需要用Ca^2＋处理大肠杆菌，使其处于感受态，VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为______。

（3）与植物原生质体融合相比，过程④特有的方法是用________处理。通常在选择培养基中需加入抗生素，目的是________________________。选择培养基上存活的杂交瘤细胞产生的抗体________(填“是”或“不是”)单克隆抗体。

（4）图示过程应用的生物技术有______________________________________

（5）细胞融合完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_________。体系中出现多种类型细胞的原因是__________________________________。

（6）单克隆抗体主要的用途有：________________________________(至少答出两点)。

Answer

防止自身环化 （反向连接）DNA连接 转化 灭活的病毒 防止培养过程中的污染 不是 动物细胞培养、动物细胞融合 骨髓瘤细胞自身融合细胞、淋巴细胞自身融合细胞 细胞融合是随机的，且融合率达不到100% 作为诊断试剂、用于治疗疾病、用于运载药物

【解析】

1、图示过程中，①为获取目的基因，形成重组质粒，②为目的基因导入导入大肠杆菌，③为获取相应的蛋白质，④为形成杂交瘤细胞。2、获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成），原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。3、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。4、动物细胞融合原理是：细胞增殖、细胞膜的流动性。细胞融合的方法有：物理法：离心、振动、电激；化学法：聚乙二醇；生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）。

（1）用限制酶EcoRⅠ和XhoⅠ切割产生不同末端，可防止目的基因和运载体自身环化，保证了目的基因和质粒的定向连接，另外还需要DNA连接酶构建磷酸二酯键将黏性末端的接口进行连接。

（2）VP40基因进入大肠杆菌后维持稳定并表达的过程称为转化。

（3）与植物原生质体融合相比，诱导动物细胞融合特有的诱导融合的方法是用灭活的病毒处理。为防止培养过程中杂菌的污染，通常在选择培养基中加入抗生素。从小鼠体内提取的B淋巴细胞不止一种类型，故选择培养基筛选得到的杂交瘤细胞产生的抗体不是单克隆抗体，故还要经筛选，得到的细胞还需转移至多孔培养板中进行再次筛选。

（4）图示过程应用的生物技术有基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合等。

（5）细胞融合完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有骨髓瘤细胞自身融合细胞、淋巴细胞自身融合细胞。体系中出现多种类型细胞的原因是细胞融合是随机的，且融合率达不到100%。

（6）单克隆抗体主要的用途有：作为诊断试剂、用于治疗疾病、用于运载药物。