Question

Mse Ⅰ、Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ三种限制酶的识别序列及切割位点分别是GAAT↓TAATTC、C↓TGCAG、G↓AATTC,如图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切点.

若要用如图质粒和外源DNA构建重组质粒,需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点。在构建新的限制酶切位点的过程中需要使用的酶是(    )

A. 限制酶PstⅠ、DNA聚合酶、DNA连接酶

B. 限制酶EcoRⅠ、DNA聚合酶、DNA连接酶

C. 限制酶EcoRⅠ、限制酶PstⅠ、DNA聚合酶

D. 限制酶PstⅠ、限制酶EcoRⅠ、DNA连接酶

Answer

B

【解析】分析图2可知，含目的基因的外源DNA中含有限制酶PstⅠ、MseⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中EcoRⅠ酶的切割位点位于目的基因中。因此构建基因表达载体时。不能用EcoRⅠ酶切割，应该用限制酶PstⅠ、MseⅠ进行切割；为了保证切割的质粒与目的基因露出的粘性末端相同，在对质粒进行改造时，应该将限制酶EcoRⅠ的切割位点改造成限制酶MseⅠ的切割位点；因此，首先需要用限制酶EcoRⅠ切割，其次需要用DNA聚合酶将相应的脱氧核苷酸序列连接上去，最后再用DNA连接酶连接形成限制酶MseⅠ的切割位点，所以B选项正确。