Question

（1）利用______________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。进行细菌纯化培养过程中，经过培养之后，可以观察到在图中___________（填图中编号）区域出现单个菌落，产生该菌落的最初细菌数目一般有___________个细菌。将乳酸菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，要使其正常生长必须给予的条件是___________。所有这些操作均为无菌操作，其目的是____________。

（2）该接种法使用的工具是______________。

（3）该工具最合适的灭菌方法是_________________。

A．火焰灼烧    B．高压蒸气灭菌    C．酒精擦拭    D．紫外线照射

（4）下表是以大肠杆菌培养基的配方。

成分	蛋白胨	牛肉膏	NaCl	蒸馏水	pH
含量	10g	5g	10g	1000ml	7．0

上述表格中各项成分能起生长因子作用的是__________；

能提供氮源的是____________。

（5）请按照正确的顺序排列配制培养基的步骤_____________。

①倒置培养基    ②计算    ③熔化    ④称量    ⑤灭菌

Answer

平板划线 ③ 1 无氧环境 防止杂菌污染 A A 牛肉膏 牛肉膏、蛋白胨 ②④③⑤①

【解析】

1、平板划线的操作的基本步骤是：
（1）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞。
（2）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处将接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面。
（3）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
（4）将平板倒置，放入培养箱中培养。
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）图1中采用的接种方法是平板划线法，该方法可以把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。随着划线的进行，菌落数越来越少，因此经过培养之后，可以观察到在③区域出现单个菌落；菌落是由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，因此产生该菌落的最初细菌数目是1个。乳酸菌属于厌氧菌，因此将乳酸菌接种到彻底灭菌的固体培养基上，要使其正常生长必须给予的条件是无氧环境。所有这些操作均为无菌操作，其目的是防止杂菌污染。

（2）平板划线法采用的接种工具是接种环，即图2中A。故选A。

（3）微生物的接种工具常用灼烧灭菌法灭菌，A正确。故选A。

（4）表中各项成分中，能承担生长因子作用的是牛肉膏，能提供氮源的是蛋白胨、牛肉膏。

（5）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、熔化、灭菌、倒平板。因此步骤是②④③⑤①。