Question

下列关于基因工程工具的说法不正确的是（    ）

A.构建基因表达载体时需要限制酶和DNA连接酶

B.DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列有专一性要求

C.载体能将外源基因导入受体细胞并使其在受体细胞中维持稳定并表达

D.在基因工程操作中，被用作载体的质粒，一般都是经过人工改造的

Answer

B

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、基因文库是指将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，所以构建基因文库和基因表达载体构建过程中需要限制酶和DNA连接酶两种工具酶，A正确；

B、DNA连接酶将不同的DNA片段的磷酸二酯键连接，对所连接的DNA两端碱基序列没有专一性要求，B错误；

C、基因工程的核心步骤是构建基因表达载体，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，能遗传给后代，并表达和发挥作用，C正确；

D、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，D正确。

故选B。