Question

图1是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（ter）和氨苄青霉素抗性基因（amp^r）。请回答下列问题：

（1）EcoR V酶切位点为，EcoR V酶切出来的线性载体P1为___________末端。

（2）用Taq 酶进行PCR扩增获得的目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸。载体P1用酶处理，在两端各添加了一个碱基为___________的脱氧核苷酸形成P2，P2和目的基因构建成重组质粒P3。

（3）为筛选出含有重组质粒P3的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到A、B、C三类菌落，其生长情况如下表（“+”代表生长，“﹣”代表不生长）。根据表中结果判断，应选择的菌落是__________（填表中字母）类，分别写出另外两类菌落质粒导入情况分别是_____________、 _____________。

平板类型 菌落类型	A	B	C
无抗生素	﹢	﹢	﹢
氨苄青霉素	﹢	﹢	﹣
四环素	﹢	﹣	﹣
氨苄青霉素+四环素	﹢	﹣	﹣

（4）若改用植物作为目的基因的受体，在噬菌体和植物病毒两种载体中，不选用__________________作为载体，其原因是_____________________。

（5）基因工程经常选用大肠杆菌作为受体。因为与植物动物相比，大肠杆菌具有_________________（答出两点即可）等优点。

（6）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，这一启示是_________________________。

Answer

平 胸腺嘧啶（T） B A类菌落含有P0 C类菌落未转入质粒 噬菌体 噬菌体的宿主是细菌，而不是植物 繁殖快、容易培养 DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体

【解析】

基因表达载体的基本结构包括复制原点、目的基因、标记基因、启动子、终止子等。根据题干信息和图形分析，P0是载体质粒，其含有的氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr）都属于标记基因，可以用检测目的基因是否导入受体细胞；EcoRV酶为限制酶，其切割质粒后悔破坏了四环素抗性基因（tetr）。

（1）该限制酶切出来的线性载体P1为平末端。

（2）据图分析，目的基因两侧为粘性末端，且漏出的碱基为A，则在载体P1的两端需要个加一个碱基T形成具有粘性末端的载体P2。

（3）根据以上分析已知，限制酶切割后破坏了四环素抗性基因，但是没有破坏氨苄青霉素抗性基因，因此含有重组质粒P3的菌落在四环素中应该不能生长，而在氨苄青霉素的培养基中能生长，结合表格分析可知，应该选择B类菌落。根据表格分析，A类菌落在氨苄青霉素和四环素的培养基中都能够生长，说明其导入的是P0；C类菌落在任何抗生素的培养基中都不能生长，说明其没有导入任何质粒。

（4）植物作为目的基因的受体，由于噬菌体只能的宿主是细菌，而不是植物，所以不选用其作为载体。

（5）大肠杆菌是微生物繁殖快、容易培养。

（6）艾弗里的实验中，只有加入DNA的培养基中出现了S型细菌说明了：DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体。