Question

苯酚是重要的化工原料，被广泛应用工业生产中，易形成污染。苯酚如果存在于 自然水域，导致水中生物死亡，也可被人体皮肤吸收引起中毒。自然界中能分解苯酚的 微生物有几百种，多为细菌、放线菌等。分离和纯化高效降解苯酚的微生物的实验流程 如图1所示：

（1）图1所示的实验流程为：取样→富集培养→_________ →平板接种。

（2）为了分离培养液中的菌株，采用如图2的接种方法是_________，此过程中接种环共灼烧灭菌_________次。

（3）在图2所示平板上分离得到的单个菌落大小、颜色、隆起度等不完全一致的原因是：_____________。

（4）初步筛选得到菌种后，还要进一步对分离的菌种做鉴定。可以采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后 的废水中苯酚残留量。这就需要先制作系列浓度梯度的 苯酚标准样品并进行显色反应，根据表格分析，3号管内苯酚浓度应该为____________

管号	1	2	3	4	5	6
标准样品中苯酚浓度（mg/L）	0					1

若预估废水中苯酚含量约为50mg/L，经分离得到的分解菌降解后约有21%的苯酚残 留，利用以上6个标准样品通过比色检测苯酚含量，则需将残留液稀释_________倍后，再进行比色。

A．5 倍    B． 10 倍    C． 20 倍

（5）实验室研究时所用苯酚浓度往往较低，而实际上工厂排放废水中酚类物质含量要高 得多。所以在高效菌种的选育上我们还可以采用一些现代生物技术手段来实现，例如：_____（试举2例）。

Answer

梯度稀释 平板划线法 4次 能降解苯酚的微生物有多种，不同种类 的微生物在平板上形成不同的菌落 0.4mg/L C 利用物理、化学手段诱变菌株；利用基因工程技术培育高效菌种；利用细胞融合技术来实现

【解析】

1．微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。
2．微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）由图可知，图1所示的实验流程为：取样→富集培养→梯度稀释→平板接种。

（2）为了分离培养液中的菌株，采用如图2的接种方法是平板划线法，此过程中接种环共灼烧灭菌4次。

（3）在图2所示平板上分离得到的单个菌落大小、颜色、隆起度等不完全一致说明平板上产生了多种微生物，能降解苯酚的微生物有多种，不同种类 的微生物在平板上形成不同的菌落．

（4）由于是标准样品，浓度差一般稳定，根据表格分析，1号试管为0，6号试管为1mg/L ，由此分析2号试管为0.2mg/L，3号管内苯酚浓度应该为0.4mg/L。若预估废水中苯酚含量约为50mg/L，经分离得到的分解菌降解后约有21%的苯酚残 留，剩余量为10.5mg/L，因此还需稀释20倍左右，才能利用以上6个标准样品通过比色检测苯酚含量。

（5）实验室研究时所用苯酚浓度往往较低，而实际上工厂排放废水中酚类物质含量要高得多。利用物理、化学手段诱变菌株；利用基因工程技术培育高效菌种；利用细胞融合技术来选育上高效菌株。