Question

利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础，下列叙述错误的是（    ）

 

A.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列

B.设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连

C.退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物

D.第三轮循环产物中同时含有引物A和引物B的DNA片段所占的比率为5/8

Answer

D

【解析】

1.PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4中游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。
2.PCR反应过程是：变性→复性→延伸

A、用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列，只需要知道一段已知目的基因的核苷酸序列，从而根据这段序列合成引物，A正确；

B、设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对而造成引物自连，B正确；

C、退火的目的是使两种引物通过碱基互补配对与两条DNA单链结合，故退火温度过高可能导致PCR反应得不到任何扩增产物，C正确；

D、DNA复制为半保留复制，DNA复制n次，共形成2n个DNA，其中两个DNA含有母链和子链（引物A或引物B），（2n-2）个DNA都含有子链（含有引物A和引物B）。第三轮循环即DNA复制3次，共形成8个DNA，其中2个DNA含有引物A或引物B，6个DNA含有引物A和引物B，占6/8，D错误。

故选D。