Question

测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。其大致流程是：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上一将滤膜转移到含有伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目，流程示意图如下图所示。其中，指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色。请回答下列问题：

（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是______________。与过滤有关的操作都要在______________旁进行，以防杂菌污染。

（2）将完成过滤之后的滤膜用无菌镊子夹起紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的 __________操作。经灼烧后的无菌镊子，需等其冷却后才能夹起滤膜，理由是______________。从功能角度分析，EMB培养基属于______________培养基。

（3）某生物兴趣小组的同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为120，紫黑色菌落数平均为40，则推测1L待测水样中的大肠杆菌数目为______________。

（4）该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径______________（填更大或更小）的滤膜。

Answer

滤杯、滤膜和滤瓶 酒精灯火焰旁 接种 避免温度过高杀死菌种 鉴定培养基 4000个
更大

【解析】

微生物实验中无菌技术：
（1）无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
（2）实验室常用的消毒方法：煮沸消毒；化学药物消毒；紫外线消毒。
（3）实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min。

（1）微生物实验中所采用得器具都应该进行灭菌处理，这样能够防止器具上带有杂菌，影响实验，故过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是滤杯、滤膜和滤瓶。与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，以防杂菌污染。

（2）将完成过滤之后的滤膜用无菌镊子夹起紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的接种操作。经灼烧后的无菌镊子，需等其冷却后才能夹起滤膜，理由是以免温度过高杀死菌种。 从功能角度分析，EMB培养基属于鉴别培养基。

（3）指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色，这说明大肠杆菌数量是紫黑色菌落数，其平均为40，该菌落数为10mL待测水样得值，故1L待测水样中的大肠杆菌数目为40×100=4000个。

（4）由于酵母菌的个体体积比大肠杆菌个体体积大，故若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径更大的滤膜。