Question

CTAB法是一种提取植物DNA的方法。CTAB是一种阳离子去污剂，能与核酸形成复合物，在高盐（＞0．7mol/L NaCl）浓度下可溶，在低盐（0．1～0．5mol/L NaCl）浓度下复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提，去除蛋白质等杂质后，加入异丙醇获得的沉淀为CTAB与核酸复合物，用体积分数为75%的乙醇洗涤可去除CTAB，具体流程如下，请回答下列问题：

（1）腊梅新鲜嫩叶在液氮中更易于研磨的原因______________，而且低温下各种物质不易被降解。

（2）过程①中，CTAB提取液中NaCl浓度为1．4mol/L，其目的是______________。

（3）氯仿-异戊醇，其密度均大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。过程②中加入氯仿异戊醇离心后，DNA主要存在于A中，则A为______________（填上清液或沉淀物）。

（4）过程③加入异丙醇出现沉淀的主要原因是______________。

（5）过程④用体积分数为75%的乙醇洗涤后的沉淀物中含有RNA，为得到较为纯净的DNA，可先用一定浓度的NaCl溶液溶解沉淀物，然后加入______________酶，再重复步骤______________（填图中序号），最后在上清液中加入冷却的、体积分数为______________，可以得到纯净的DNA。

Answer

冷冻后的细胞易破碎 溶解CTAB与核酸的复合物 上清液 CTAB与核酸的复合物因溶解度降低而沉淀 RNA ①② 95%的酒精

【解析】

实验原理：提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。
1.DNA的溶解性（1）DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同（0.14mol/L溶解度最低），利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。（2）DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。
2.DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60-80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。
3.DNA的鉴定在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

（1）腊梅新鲜嫩叶在液氮中更易于研磨的原因冷冻后的细胞易破碎，而且低温下各种物质不易被降解。

（2）由题干信息“CTAB是一种阳离子去污剂，能与核酸形成复合物，在高盐（＞0.7mol/L NaCl）浓度下可溶”可知，过程①中，CTAB提取液中NaCl浓度为1.4mol/L，其目的是溶解CTAB与核酸的复合物。

（3）氯仿-异戊醇，其密度均大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，这说明过程②中加入氯仿-异戊醇离心后，DNA主要存在于A中，则A为上清液。

（4）过程③加入异丙醇出现沉淀的主要原因是CTAB与核酸的复合物因溶解度降低而沉淀。

（5）去除沉淀物中的RNA需要使用RNA酶使其分解，故可先用一定浓度的NaCl溶液溶解沉淀物，然后加入RNA酶，再重复步骤①②（填图中序号），最后在上清液中加入冷却的、体积分数为95%的酒精，可以得到纯净的DNA。