Question

Ⅰ．下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及 切割位点

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是____________。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_______。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用_______方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_______，对于该部位，这两种酶_______（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

Ⅱ．微卫星DNA是广泛分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度特异性并且数量丰富，因此，微卫星DNA可以作为分子标记，并有着广泛应用。

（5）为了分离捕获到某种生物的微卫星DNA分子标记，可以用生物素标记的特定简单重复序列作为探针，与该生物的_______（填“基因组”或“cDNA”）文库进行杂交，然后再经多个步骤筛选获取微卫星DNA，对微卫星DNA进行体外扩增的基本反应步骤为__________________。

（6）扩增分离到的微卫星DNA序列的技术为PCR技术，其原理是______________。

（7）根据“微卫星DNA”的特点判断，这种分子标记可应用于___________（填字母）。

A．人类亲子鉴定                B．种群遗传多样性研究

C．诱导基因突变                D．冠状病毒遗传物质测序

Answer

Bcl I和Hind III 四环素 抗原—抗体杂交 都不能 7 基因组 变性、复性/退火、延伸（DNA解链—引物结合到互补链—互补链的合成）（—重复） DNA双链复制的原理 AB

【解析】

基因工程是狭义的遗传工程，基因工程的基本原理是让人们感兴趣的基因（即目的基因）在宿主细胞中稳定高效地表达。为了实现基因工程的目标，通常要有多种工具酶、目的基因、载体和宿主细胞等基本要素，并按照一定的程序进行操作，它包括目的基因的获得、重组DNA的形成，重组DNA导入受体细胞也称（宿主）细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达等几个方面。基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。

Ⅰ.（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，目的是使目的基因和质粒具有相同的粘性末端以便于连接，质粒上没有Sau3AⅠ酶切位点，且质粒上有两个BamHⅠ酶切位点（均位于抗性基因上），因此应选用的限制酶是Bcl I和Hind III。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加四环素（氨苄青霉素抗性基因被破坏）。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用抗原—抗体杂交方法，将目的基因表达的蛋白当作抗原，加入对应的抗体。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶都不能识别，因此都不能被切开。

（4）BamHⅠ和BclⅠ的酶切位点中都有Sau3A I的识别序列，若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。

Ⅱ．（5）基因组文库是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA 片段克隆到某种载体上而形成的集合，可以用生物素标记的特定简单重复序列作为探针，与该生物的基因组文库进行杂交。PCR是体外进行DNA复制的技术，基本反应步骤为变性（解旋）、复性/退火（让引物与模板结合）、延伸（DNA解链—引物结合到互补链—互补链的合成）。

（6）PCR技术是体外进行DNA复制的技术，其原理是DNA双链复制的原理。

（7）微卫星DNA是均匀分布于真核生物基因组中的简单重复序列，由于重复单位的重复次数在个体间呈高度变异性并且数量丰富，这种分子标记可应用于亲子鉴定、种群遗传多样性研究。故选AB。